Mahalagang Pagkakaiba – HPLC vs HPTLC
Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng HPLC at HPTLC ay pinahihintulutan ng HPLC ang quantitative separation ng mga bahagi sa isang sample samantalang hindi pinapayagan ng HPTLC ang quantitative separation ng mga component sa isang sample.
Ang Chromatography ay isang pisikal na paraan ng paghihiwalay na ginagamit upang paghiwalayin at tukuyin ang mga bahagi sa isang timpla. Ang parehong HPLC at HPTLC ay mga chromatographic technique. Ang HPLC ay high performance liquid chromatography. Ang HPTLC ay high performance thin layer chromatography.
Ano ang HPLC?
Ang HPLC ay high-performance na liquid chromatography. Ito ay isang analytical technique na ginagamit upang paghiwalayin, tukuyin at tumyak ng dami ang mga bahagi sa isang timpla. Sa pamamaraang ito, ang sample ay natutunaw sa isang angkop na solvent. Pagkatapos ang solvent na may sample ay dumaan sa isang pump na may ibinigay na presyon. Ang bomba ay puno ng solidong adsorbent na materyal. Pagkatapos ang ilang mga bahagi ay mahigpit na nagbubuklod sa sumisipsip na materyal samantalang ang ibang mga bahagi ay maluwag na nakagapos. Ito ay nagiging sanhi ng mga bahagi na magkaroon ng iba't ibang mga rate ng daloy sa pamamagitan ng pump. Samakatuwid, ang mga bahagi ay madaling paghiwalayin.
Figure 01: Isang HPLC System
Ang adsorbent na materyal na pumupuno sa pump ay kilala bilang ang nakatigil na yugto. Ang solvent na may natunaw na sample ay kilala bilang mobile phase. Ang bomba na ginamit sa pamamaraang ito ay tinatawag na haligi. Ang haligi ay puno ng isang adsorbent na materyal, pinaka-karaniwan, mga particle ng silica. Ang laki ng mga particle na ito ay maaaring mula sa 2-50 μm. Ang proseso ng paghihiwalay ay apektado ng komposisyon ng mobile phase at ang temperatura ng system. Ang mga pakikipag-ugnayan sa pagitan ng nakatigil na bahagi at bahagi sa sample ay maaaring mga hydrophobic na pakikipag-ugnayan, mga pakikipag-ugnayan ng dipole-dipole, ionic bonding, atbp.
Ang presyon ng pagpapatakbo ng HPLC ay mas mataas kaysa sa tradisyunal na liquid chromatography. Ito ay namamalagi sa paligid ng 50-350 bar. Ang pagkakaiba sa pagitan ng liquid chromatography at HPLC ay na sa liquid chromatography, ang sample ay bumabagsak sa column sa ilalim ng gravity samantalang, sa HPLC, ang sample ay na-pressure sa column. Ang laki ng column at ang sumisipsip na mga particle ay napakaliit din kung ihahambing sa tradisyonal na liquid chromatography. Gayunpaman, ang resolution na ibinigay ng HPLC technique ay mas mataas.
Ano ang HPTLC?
Ang HPTLC ay high performance thin layer chromatography. Ito ay ang advanced at automated na anyo ng tradisyonal na TLC. Ang pamamaraan na ito ay nagbibigay ng isang mahusay na resolusyon sa isang maikling panahon. Sa pamamaraang ito ng pagsusuri, ang sample at isang sanggunian ay maaaring masuri nang sabay, na nagpapahintulot sa sample na maihambing sa sanggunian. Nagbibigay ito ng pinahusay na katumpakan ng analitikal kaysa sa iba pang mga diskarte sa chromatographic. Ang oras na kinuha para sa pagsusuri ay mas kaunti. Ang pamamaraan ay isang murang pamamaraan.
Figure 02: Isang Pagsusuri ng Food Dyes gamit ang HPTLC
Ang pamamaraan ng HPTLC ay isang simpleng proseso, at ang hakbang sa paghahanda ng sample ay inaalis din (Sa tradisyonal na TLC, kasama ang sample na hakbang sa paghahanda bago ang paghihiwalay. Ang hakbang na ito ay nagsasangkot ng paglilinis at pagpapayaman). Maaaring gamitin ang solvent nang direkta nang walang anumang pre-treatment bagama't ang ibang chromatographic technique ay nangangailangan ng mga pre-treatment gaya ng degassing, filtration, atbp.
Ang adsorbent material na ginagamit sa HPTLC ay silica na may napakaliit na laki ng particle. Sa tradisyonal na TLC, ang laki ng butil ng silica ay 5-20 μm samantalang, sa HPTLC, ito ay 4-8 μm. Ang sample ay inilapat sa HPTLC plate gamit ang isang applicator. Nagbibigay ito ng pare-pareho at ligtas na aplikasyon. Pagkatapos ang mga plato ay inilalagay sa isang silid na may mobile phase. Ang silid ay dapat na puspos ng singaw ng mobile phase. Pagkatapos ng proseso ng HPTLC, ang mga spot na lumipat ay maaaring makita. Kapag nakakakita ng mga batik sa plato, ang pamamaraan ng HPTLC ay gumagamit ng angkop na rehiyon ng UV o isang silid ng iodine.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng HPLC at HPTLC?
HPLC vs HPTLC |
|
| Ang HPLC ay high performance na liquid chromatography. | Ang HPTLC ay high performance thin layer chromatography. |
| Technique | |
| Sa HPLC, ang mobile phase na may solvent ay ipinapasa sa isang column na puno ng stationary phase. | Sa HPTLC, makikita ang sample sa TLC plate at inilalagay sa loob ng chamber na naglalaman ng mobile phase; pagkatapos ay pinapayagan ang sample na lumipat pataas sa plate kasama ang mobile phase. |
| Pagsukat | |
| Sa HPLC, ang mga pagkakaiba sa pagitan ng mga rate ng daloy ng mga bahagi sa column ay ginagamit upang paghiwalayin ang mga bahagi sa sample. | Sa HPTLC, ang mga pagkakaiba sa pagitan ng mga distansyang nilakbay ng bawat bahagi sa sample ay ginagamit upang paghiwalayin ang mga bahagi sa sample. |
| Quantitative Separation | |
| HPLC ay nagbibigay-daan sa dami ng paghihiwalay ng mga bahagi sa isang sample. | Hindi pinapayagan ng HPTLC ang dami ng paghihiwalay ng mga bahagi sa isang sample. |
Buod – HPLC vs HPTLC
Ang HPLC at HPTLC ay dalawang chromatographic technique. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng HPLC at HPTLC ay ang HPLC ay nagbibigay-daan sa quantitative separation ng mga component sa isang sample samantalang ang HPTLC ay hindi pinapayagan ang quantitative separation ng mga component sa isang sample.
