Ang pangunahing pagkakaiba ng FPLC at HPLC ay ang FPLC ay isang uri ng liquid chromatography na naglilinis ng malalaking biomolecules gaya ng mga protina, nucleotides at peptides, habang ang HPLC ay isang uri ng liquid chromatography na naghihiwalay sa maliliit na molekular weight compound.
Ang Liquid chromatography ay isang pamamaraan na ginagamit upang paghiwalayin ang isang sample sa mga indibidwal na bahagi nito. Nangyayari ang paghihiwalay na ito dahil sa pakikipag-ugnayan ng mga partikular na sample sa mga mobile at nakatigil na phase. Ang mga bahagi sa loob ng isang sample ay pinaghihiwalay batay sa affinity ng bawat bahagi para sa mobile phase sa liquid chromatography. Habang dumadaan ang mobile phase at sample sa isang column, magsisimulang maghiwalay ang mga bahagi ng sample sa mga banda na maaaring makita ng UV-VIS spectroscopy. Samakatuwid, ang FPLC at HPLC ay dalawang uri ng liquid chromatography techniques.
Ano ang FPLC?
Ang FPLC ay isang uri ng liquid chromatography na naglilinis ng malalaking biomolecules gaya ng mga protina, nucleotides, at peptides. Ang fast protein liquid chromatography (FPLC) ay unang binuo at ibinebenta sa Sweden ng Pharmacia company noong 1982. Madalas itong ginagamit upang pag-aralan o linisin ang mga pinaghalong protina. Nagaganap ito batay sa prinsipyo ng mga sample na bahagi ng mga affinity para sa paglipat ng fluid (mobile phase) at isang porous solid material (stationary phase). Sa FPLC, ang mobile phase ay isang buffer, at ang stationary phase ay isang resin na binubuo ng mga kuwintas. Karaniwan itong binubuo ng cross-linked agarose na naka-pack sa isang cylindrical glass o plastic column.
Figure 01: FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography) Apparatus
Sa karamihan ng diskarte ng FLPC, ginagamit ang ion exchange resin. Samakatuwid, ang protina ng interes ay magbubuklod sa dagta sa pamamagitan ng pakikipag-ugnayan ng singil. Ang pamamaraan ng FLPC ay gumagamit din ng dalawang buffer: buffer 1 (ang tumatakbong buffer) at buffer 2 (ang elution buffer). Sa una, kapag tumatakbo ang buffer at sample mixture ay tumatakbo sa column, ang protina ng interes sa mixture ay magbubuklod sa resin sa pamamagitan ng isang charge interaction. Ngunit ang protina ng interes ay nagiging dissociated at bumalik sa solusyon sa elution buffer kapag ang elution buffer ay tumatakbo sa column sa dulo ng proseso. Nang maglaon, ang solusyon (eluant na naglalaman ng protina ng interes) ay dumadaan sa dalawang detektor, na sumusukat sa konsentrasyon ng asin at konsentrasyon ng protina. Habang na-eluted ang bawat protina, lumilitaw ito bilang isang "peak" sa panahon ng pagtuklas at maaaring kolektahin para sa karagdagang paggamit.
Ano ang HPLC?
Ang HPLC ay isang uri ng liquid chromatography na naghihiwalay sa maliliit na molekular na weight compound. Noong 1969, ang unang HPLC ay komersyal na ginawa ng Waters Corporation, USA. Sa high-performance liquid chromatography (HPLC), ang isang sample mixture (analyte) sa isang solvent (mobile phase) ay ibinobomba sa pamamagitan ng isang column na may chromatographic packing material (stationary phase) sa mataas na presyon. Ang sample mixture ay dinadala ng gumagalaw na carrier gas stream ng helium o nitrogen.
Figure 02: HPLC (High-Performance Liquid Chromatography)
Ang mga bahagi sa sample na pinaghalong may pinakamaliit na dami ng pakikipag-ugnayan sa nakatigil na yugto o pinakamaraming dami ng pakikipag-ugnayan sa mobile phase ay lalabas sa column nang mas mabilis. Sa kabilang banda, ang mga bahagi sa sample na pinaghalong may pinakamaraming dami ng pakikipag-ugnayan sa nakatigil na yugto o ang pinakamababang halaga ng pakikipag-ugnayan sa bahagi ng mobile ay lalabas sa column nang mas mabagal. Batay sa prinsipyo ng pakikipag-ugnayan sa itaas, maaaring paghiwalayin ang mga bahagi ng sample mixture. Bukod dito, tinutukoy ng instrument detector ang bawat bahagi ng sample mixture na lumalabas sa column. Ginagamit ang HPLC upang suriin ang kapaligiran at biyolohikal na mga sample para sa pagkakaroon o kawalan ng mga kilalang compound, gaya ng mga gamot, lason o pestisidyo. Ginagamit ito sa iba't ibang industriya tulad ng pharmaceutical, environmental, forensics, at kemikal.
Ano ang Pagkakatulad sa pagitan ng FPLC at HPLC?
- Ang FPLC at HPLC ay mga uri ng liquid chromatography.
- Ginagamit ang dalawa para paghiwalayin at tukuyin ang mga biological sample.
- Mayroon silang liquid mobile phase at solid stationary phase.
- Ang parehong mga diskarte ay gumagamit ng isang column upang ipasa ang sample.
- Ang mga diskarteng ito ay gumagamit ng mga pump, detector, valve at software para sa sample separation at detection.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng FPLC at HPLC?
Ang FPLC ay isang uri ng liquid chromatography na ginagamit upang linisin ang malalaking biomolecules gaya ng mga protina, nucleotides, at peptides. Ang HPLC ay isang uri ng liquid chromatography na ginagamit upang paghiwalayin ang maliliit na molekular na timbang na compound. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng FPLC at HPLC. Bukod dito, ang FPLC ay gumagamit ng pH at conductivity monitor pati na rin ang mga fraction collector. Sa kabaligtaran, ang HPLC ay hindi gumagamit ng pH at conductivity monitor at fraction collectors.
Ang infographic sa ibaba ay naglilista ng higit pang pagkakaiba sa pagitan ng FPLC at HPLC sa tabular form.
Buod – FPLC vs HPLC
Ang Chromatography ay isang laboratoryo analytical technique na ginagamit para sa paghihiwalay ng mga bahagi mula sa isang mixture. Ito ay nahahati sa ilang uri gaya ng column chromatography, gas chromatography, liquid chromatography, ion-exchange chromatography, atbp. Ang FPLC at HPLC ay dalawang uri ng liquid chromatography techniques. Ang FPLC ay isang uri ng liquid chromatography na ginagamit upang linisin ang malalaking biomolecules gaya ng mga protina, nucleotides, at peptides. Sa kabilang banda, ang HPLC ay isang uri ng liquid chromatography na ginagamit upang paghiwalayin ang maliliit na molekular na timbang na compound. Kaya, ito ang buod ng kung ano ang pagkakaiba sa pagitan ng FPLC at HPLC.
