Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng RP HPLC at HIC ay ang RP HPLC ay gumagamit ng mas polar na mobile phase at hindi gaanong polar na nakatigil na phase. Samantalang, ang HIC ay gumagamit ng hydrophobic stationary phase na nagbibigay-daan sa mga hydrophobic molecule na idikit dito.
Ang Chromatography ay isang analytical technique na tumutulong sa paghihiwalay ng mixture sa mga bahagi nito. Una, kailangan nating i-dissolve ang sample na ihihiwalay sa isang solusyon. Ang solusyon-substance mixture na ito ay tinatawag na mobile phase. Pagkatapos ang mobile phase ay dumaan sa isa pang materyal na tinatawag na stationary phase. Tinutukoy ng nakatigil na yugto ang paghihiwalay ng mga bahagi. Ang paghihiwalay ay nangyayari dahil sa pagkahati ng materyal sa pagitan ng mobile phase at ng nakatigil na yugto.
Ano ang RP HPLC?
Ang terminong RP HPLC ay kumakatawan sa Reverse Phase High-Performance Liquid Chromatography. Ito ay nagsasangkot ng paghihiwalay ng mga bahagi sa isang halo, ayon sa hydrophobicity. Ang mga hydrophobic na bahagi sa mobile phase ay nag-uugnay sa mga immobilized hydrophobic ligand sa nakatigil na bahagi, habang ang mga hydrophilic na bahagi ay nag-e-elute sa nakatigil na yugto nang hindi nakakabit sa ibabaw ng nakatigil na yugto.
Figure 01: HPLC Apparatus
Bukod dito, ang paraang ito ay may higit na reproducibility kumpara sa iba pang mga chromatographic technique, at nagpapakita rin ito ng malawak na applicability. Samakatuwid, ginagamit namin ang pamamaraang ito sa mga laboratoryo para sa higit sa 75% ng lahat ng mga pamamaraan ng HPLC. Kadalasan, gumagamit kami ng may tubig na timpla ng tubig na may miscible polar organic solvent bilang mobile phase. Kaya, titiyakin nito ang pagkakabit ng mga hydrophobic na bahagi sa solusyon sa ibabaw ng nakatigil na yugto.
Ano ang HIC?
Ang terminong HIC ay nangangahulugang Hydrophobic Interaction Chromatography. Ito ay isang uri ng reverse phase HPLC, at ang pamamaraang ito ay pangunahing ginagamit para sa paghihiwalay ng malalaking biomolecules tulad ng mga protina. Sa pamamaraang ito, kailangan nating gumamit ng isang may tubig na daluyan upang gawin ang sample ng biomolecule. Ito ay dahil ang mga organikong solvent ay maaaring maging sanhi ng denaturing ng mga protina. Bukod dito, ang pamamaraan na ito ay gumagamit ng pakikipag-ugnayan sa pagitan ng malalaking molekula na may bahagyang hydrophobic na ibabaw ng nakatigil na yugto. Higit pa rito, kailangan nating gumamit ng mataas na konsentrasyon ng asin sa sample dahil hinihikayat nito ang protina na mapanatili sa packing; ang prosesong ito ay tinatawag na s alting out. Sa pamamagitan ng unti-unting pagbaba ng konsentrasyon ng asin, maaari nating gawing hiwalay ang biomolecules ayon sa kanilang hydrophobicity.
Karaniwan, ginagamit ng paraang ito ang mga kundisyon na kabaligtaran ng ion-exchange chromatography. Sa pamamaraang ito, una, kailangan nating magpasa ng buffer solution sa column upang mabawasan ang solvation ng solute sa sample. Ginagawa nitong malantad ang mga hydrophobic na rehiyon ng protina. Gayunpaman, kapag ang molekula ay mas hydrophobic, mas kaunting asin ang kinakailangan upang maisulong ang pagbubuklod. Dito, ang mas kaunting hydrophobic solute ay unang na-eluted, at ayon sa pagbabago sa konsentrasyon ng asin, mas maraming hydrophobic solute ang huling na-eluted.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng RP HPLC at HIC?
Ang Chromatography ay isang analytical technique para sa paghihiwalay ng mga bahagi sa isang mixture. Ang RP HPLC at HIC ay dalawang dalubhasang pamamaraan ng chromatographic. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng RP HPLC at HIC ay ang RP HPLC ay gumagamit ng isang mas polar na mobile phase at hindi gaanong polar na nakatigil na phase, samantalang ang HIC ay gumagamit ng isang hydrophobic stationary phase, na nagbibigay-daan sa mga hydrophobic molecule na idikit dito.
Ibinubuod ng infographic sa ibaba ang pagkakaiba sa pagitan ng RP HPLC at HIC.
Buod – RP HPLC vs. HIC
Ang Chromatography ay isang analytical technique para sa paghihiwalay ng mga bahagi sa isang mixture. Ang RP HPLC at HIC ay dalawang dalubhasang pamamaraan ng chromatographic. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng RP HPLC at HIC ay ang RP HPLC ay gumagamit ng isang mas polar na mobile phase at isang mas kaunting polar na nakatigil na yugto, samantalang ang HIC ay gumagamit ng isang hydrophobic na nakatigil na yugto, na nagbibigay-daan sa mga hydrophobic na molekula na idikit dito.
