Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng reverse phase at normal na phase na HPLC ay ang reverse phase na HPLC ay gumagamit ng nonpolar stationary phase at polar mobile phase samantalang ang normal na phase na HPLC ay gumagamit ng polar stationary phase at isang less polar mobile phase.
Ang normal na yugto ng HPLC ay ang pinakalumang pamamaraan ng HPLC na ginamit ni Tswett sa kanyang paghihiwalay ng mga extract ng halaman; gumamit siya ng chalk sa isang glass column. Ito ang klasikal na mode ng chromatography na humantong sa pagpapangalan dito bilang "normal" na pamamaraan. Ang reversed-phase HPLC, sa kabilang banda, ay kabaligtaran ng normal na pamamaraan, na binuo ng mga siyentipiko kamakailan.
Ano ang Reverse Phase HPLC?
Reverse phase Ang HPLC ay isang chromatographic technique kung saan gumagamit kami ng hydrophobic stationary phase. Sa lahat ng mga pamamaraan ng HPLC, ginagamit namin ang pamamaraang ito para sa humigit-kumulang 70% dahil sa malawak na kakayahang magamit nito, at muling paggawa. Ang stationary phase ay nonpolar at ang mobile phase ay polar.
Kadalasan, ang mga siyentipiko ay gumagamit ng may tubig na timpla ng tubig na may nahahalo, polar na organikong solvent, gaya ng acetonitrile o methanol bilang mobile phase. Samakatuwid, ang mga analyte ay nakikipag-ugnayan sa nonpolar stationary phase.
Ano ang Normal Phase HPLC?
Normal phase Ang HPLC ay isang chromatographic technique kung saan gumagamit kami ng hydrophilic stationary phase. Ito ang tradisyunal na pamamaraan ng HPLC, kahit na hindi namin ito gaanong ginagamit. Ang nakatigil na bahagi ay polar, at ang mobile na bahagi ay nonpolar. Higit sa lahat, ang mobile phase ng diskarteng ito ay 100% organic. Ibig sabihin, walang tubig na ginagamit para dito.
Figure 01: Isang sample na profile para sa normal na phase at reverse phase na mga chromatogram ng HPLC ayon sa polarity ng mga bahagi sa analyte.
Karaniwan, ang stationary phase ay naglalaman ng silica, cyano, diol, amino bonded phase, atbp. Ang mga mobile phase ay kinabibilangan ng mga organikong solvent gaya ng hexane, ethyl acetate, atbp. Ang diskarteng ito ay nakabatay sa pagpapanatili ng solvent o analyte molecules papunta sa polar stationary phase.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Reverse Phase at Normal Phase HPLC?
Reverse phase Ang HPLC ay isang chromatographic technique kung saan gumagamit kami ng hydrophobic stationary phase. Ang nakatigil na yugto ng pamamaraang ito ay nonpolar habang ang mobile phase ay polar. Bukod dito, ang mga siyentipiko ay gumagamit ng may tubig na timpla ng tubig na may nahahalo, polar na organikong solvent, tulad ng acetonitrile o methanol bilang mobile phase sa reverse phase na HPLC. Sa kaibahan, ang normal na yugto ng HPLC ay isang chromatographic technique kung saan gumagamit kami ng hydrophilic stationary phase. Ang nakatigil na yugto ng pamamaraang ito ay polar habang ang mobile phase ay nonpolar. Bukod pa riyan, ginagamit ng mga siyentipiko ang mga organikong solvent tulad ng hexane, ethyl acetate, atbp. bilang mobile phase ng normal na phase na HPLC. Ang infographic sa ibaba ay nagpapakita ng pagkakaiba sa pagitan ng reverse phase at normal na phase HPLC sa isang tabular form.
Buod – Reverse Phase vs Normal Phase HPLC
Reverse phase at normal phase HPLC techniques ay dalawang liquid chromatographic technique. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng reverse phase at normal na phase HPLC ay ang reverse phase HPLC ay gumagamit ng isang nonpolar stationary phase at isang polar mobile phase samantalang ang normal na phase HPLC ay gumagamit ng isang polar stationary phase at isang mas polar mobile phase.
