Mahalagang Pagkakaiba – Immunofluorescence kumpara sa Immunohistochemistry
Ang Disease diagnostics, na gumagamit ng molecular biological na pamamaraan, ay naging isang umuusbong na bahagi ng teknolohiyang klinikal na laboratoryo. Kabilang dito ang lahat ng pagsusuri at pamamaraan upang matukoy ang isang sakit at maunawaan ang sanhi ng isang sakit sa pamamagitan ng pagsusuri sa DNA, RNA o mga ipinahayag na protina sa isang organismo. Ang mabilis na pag-unlad sa molecular diagnostics ay nagbigay-daan sa pangunahing pananaliksik sa mga nakakahawang sakit at hindi nakakahawa. Ginagamit ang mga ito upang matukoy ang mga pagbabago sa pagkakasunud-sunod o mga antas ng pagpapahayag sa mga mahahalagang gene o protina na kasangkot sa sakit. Ang Immunofluorescence (IF) at Immunohistochemistry (IHC) ay dalawang malawakang ginagamit na mga diskarte sa biology ng cancer. Ang IF ay isang uri ng IHC kung saan ang paraan ng pagtukoy ng fluorescence ay ginagamit upang pag-aralan ang mga monoclonal at polyclonal antibodies, samantalang ang IHC ay gumagamit ng mga pamamaraang batay sa kemikal upang makita ang mga monoclonal at polyclonal antibodies. Ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng IF at IHC.
Ano ang Immunofluorescence (IF)?
Ang Immunofluorescence ay isang diskarte sa pag-detect kung saan ang mga antibodies na ginamit sa assay ay nilagyan ng label gamit ang mga fluorescent dyes o fluorescent na protina para sa layunin ng pagtuklas. Ang mga may label na pangalawang antibodies ay maaaring magresulta sa mga hindi gustong signal sa background; samakatuwid, ang pamamaraan ng IF ay batay sa pag-label sa mismong pangunahing antibody sa kasalukuyan upang maiwasan ang mga hindi gustong signal sa panahon ng pagtuklas. Sa pamamagitan ng pamamaraang ito, napipigilan ang di-tiyak na pagbubuklod sa pagitan ng pangunahin at pangalawang antibody, at ito ay mas mabilis dahil walang pangalawang hakbang sa pagpapapisa ng itlog na kasangkot. Pinahusay din ang kalidad ng data.
Figure 01: Double immunofluorescence staining para sa BrdU, NeuN, at GFAP
Ang Fluorochromes o fluorescent dyes ay mga compound na maaaring sumipsip ng radiation, mas mabuti ang ultra violet radiation na nasasabik. Kapag ang mga particle ay umabot sa ground state mula sa excited na estado, naglalabas sila ng radiation na nakukuha at nakita ng isang detektor upang bumuo ng isang spectrum. Napakahalaga na ang fluorescent na label ay katugma at matatag para sa partikular na reaksyon at dapat itong maayos na maiugnay sa antibody upang makakuha ng tumpak na mga resulta. Ang isa sa mga pinaka ginagamit na fluorochromes ay ang fluorescein isothiocyanate (FITC), na may berdeng kulay, na may pagsipsip at paglabas ng peak wavelength na 490 nm at 520 nm, ayon sa pagkakabanggit. Ang Rhodamine, isa pang ahente na ginagamit sa IF, ay pula sa kulay at may natatanging pagsipsip at paglabas ng peak wavelength na 553 nm at 627 nm.
Ano ang Immunohistochemistry (IHC)?
Ang IHC ay isang molecular testing method na ginagawa upang matukoy at makumpirma ang presensya ng antigen sa target na cell. Ang target na cell ay maaaring isang nakakahawang particle, isang microbial pathogen o isang malignant na tumor cell. Gumagamit ang IHC ng monoclonal at polyclonal antibodies upang matukoy ang pagkakaroon ng mga antigen na nasa ibabaw ng cell ng mga target na selula. Ang pamamaraan ay batay sa antigen-antibody binding. Ang isang detection marker ay pinagsama sa mga antibodies na ito upang makita ang presensya o kawalan ng partikular na antigen. Ang mga marker na ito ay maaaring mga kemikal na marker gaya ng mga enzyme, fluorescently tagged antibodies o radio labeled antibodies.
Figure 02: Mouse-brain slice na nabahiran ng Immunohistochemistry
Ang pinakasikat na aplikasyon ng IHC ay sa cancer cell biology upang matukoy ang pagkakaroon ng mga malignant na tumor, ngunit ginagamit din ito para sa pagtuklas ng mga nakakahawang sakit.
Ano ang Mga Pagkakatulad sa Pagitan ng Immunofluorescence at Immunohistochemistry?
- Immunofluorescence at Immunohistochemistry ay nagaganap sa ilalim ng mga kondisyong in vitro.
- Ang parehong mga diskarte ay batay sa antigen-antibody
- Ang dalawa ay napakabilis na diskarte.
- Ang mga resulta ng mga diskarte ay maaaring kopyahin.
- Parehong napabuti ang kalidad ng data.
- Ang mga diskarteng ito na ginagamit sa mga diagnostic para sa cancer at mga nakakahawang sakit.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Immunofluorescence at Immunohistochemistry?
Immunofluorescence vs Immunohistochemistry |
|
| Ang IF ay isang detection technique kung saan ang mga antibodies na ginamit sa assay ay nilagyan ng label gamit ang fluorescent dyes o fluorescent proteins para sa detection. | Ang IHC ay isang diskarte sa pag-detect kung saan ang mga antibodies na ginamit sa assay ay nilagyan ng label gamit ang mga kemikal o radioactive na elemento para sa pagtuklas. |
| Katumpakan | |
| Mas mataas ang accuracy sa IF technique kumpara sa IHC. | Mas mababa ang katumpakan sa IHC. |
| Specificity | |
| KUNG mas partikular. | Hindi gaanong partikular ang IHC. |
Buod – Immunofluorescence vs Immunohistochemistry
Ang mga mekanismo ng molekular ay nagdulot ng maraming pagbabago sa larangan ng medisina, na nagbunga ng mga advanced na pamamaraan ng pagsubok sa molekular na nagdulot ng mga rebolusyon sa larangan ng diagnostics. Ang mga imbensyon na ito ay humantong sa isang mabilis at tumpak na pagkakakilanlan at pagkumpirma ng sakit, sa gayon ay nagbibigay-daan sa matagumpay na pangangasiwa at paggawa ng mga gamot. Ang mga pamamaraan na ito ay ginagamit din sa pharmacology upang mahanap ang mga target ng mga gamot at upang kumpirmahin ang mga pharmacokinetic na katangian ng gamot sa panahon ng metabolismo ng gamot. Ang IF at IHC ay dalawang diagnostic na pamamaraan na nakabatay sa konsepto ng antigen at antibody binding, bagama't magkaiba ang mode ng pagtuklas sa parehong mga diskarte. Ang IF ay gumagamit ng prinsipyo ng fluorescence upang makita ang antigen at ang IHC ay gumagamit ng konsepto ng kemikal na conjugation upang makita ang antigen. Ito ang pagkakaiba ng IF at IHC.
I-download ang PDF na Bersyon ng Immunofluorescence vs Immunohistochemistry
Maaari mong i-download ang PDF na bersyon ng artikulong ito at gamitin ito para sa mga offline na layunin ayon sa tala ng pagsipi. Paki-download ang bersyon ng PDF dito Pagkakaiba sa pagitan ng Immunofluorescence at Immunohistochemistry.
