Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng direkta at hindi direktang immunofluorescence ay ang direktang immunofluorescence ay gumagamit ng isang antibody na gumagana laban sa target ng interes habang ang hindi direktang immunofluorescence ay gumagamit ng dalawang antibodies upang lagyan ng label ang target ng interes.
Ang Immunofluorescence o cell imaging ay isang pamamaraan na ginagamit upang lagyan ng label ang isang partikular na target na antigen na may fluorophore. Dito, ang fluorophore ay isang fluorescent chemical compound na maaaring muling magpalabas ng liwanag sa magaan na paggulo. Kapag ang isang fluorophore ay nagbubuklod sa target na antigen, pinapayagan nito ang pagtuklas ng target na molekula sa sample. Upang higit pang ilarawan ito, kapag ang isang antigen ay nagbubuklod sa isang tiyak na antibody, maaari itong i-conjugated sa mga fluorophores. Kaya naman, madaling matukoy ang presensya ng target na antigen sa sample kapag nagmamasid sa ilalim ng fluorescence microscope.
Bukod dito, mayroong dalawang uri ng immunofluorescence; direkta at hindi direktang immunofluorescence. Ang pagkakaiba sa pagitan ng direkta at hindi direktang immunofluorescence ay higit sa lahat ay nakasalalay sa bilang ng mga antibodies na ginamit at ang fluorophore conjugation. Iyon ay, sa direktang immunofluorescence, ang fluorophore ay direktang nakakabit sa pangunahing antibody habang sa hindi direktang immunofluorescence, ang fluorophore ay nakikipag-ugnay sa pangalawang antibody.
Ano ang Direct Immunofluorescence?
Ang Immunofluorescence ay gumagamit ng mga antibodies upang matukoy ang mga partikular na target na antigens. Ang direktang immunofluorescence ay isa sa dalawang uri ng immunofluorescence. Sa direktang immunofluorescence, ang isang solong antibody (pangunahing antibody) ay nagsasangkot at ang fluorophore ay direktang nakikipag-conjugates sa pangunahing antibody. Sa pagbubuklod ng antibody sa target na antigen, ang fluorophore ay naglalabas ng fluorescence na maaaring makita ng isang fluorescence microscope.
Figure 01: Direktang Immunofluorescence
Gayunpaman, ang direktang immunofluorescence ay isang mamahaling paraan dahil mahal ang pangunahing conjugated antibodies kumpara sa pangalawang antibodies. Gayunpaman, hindi ito nagsasangkot ng karagdagang hakbang samakatuwid, isang mas maikling pamamaraan. Higit pa rito, ang mga di-tiyak na pagbubuklod ay nabawasan sa direktang immunofluorescence. Samakatuwid, mababa ang cross-reactivity ng mga species. Ngunit sa pagtuklas, mahina ang sensitivity ng direktang immunofluorescence kumpara sa hindi direktang immunofluorescence.
Ano ang Indirect Immunofluorescence?
Ang Indirect immunofluorescence ay ang pangalawang uri ng immunofluorescence na kinabibilangan ng dalawang uri ng antibodies gaya ng pangunahin at pangalawang antibodies sa pag-label ng target na antigen. Sa pamamaraang ito, ang fluorophore ay nakikipag-ugnay sa pangalawang antibody. Kaya, ang diskarteng ito ay nagsasangkot ng karagdagang hakbang.
Figure 02: Immunofluorescence
Gayunpaman, mataas ang sensitivity sa pamamaraang ito dahil ang ilang fluorophores ay maaaring i-conjugated sa pangalawang antibodies at ginagawa nitong mas madali ang pagtuklas. Higit pa rito, ang hindi direktang immunofluorescence ay mas mura dahil sa ang katunayan na ang conjugation ng pangalawang antibodies ay mas mura at mas madali. Kung ihahambing sa direktang immunofluorescence, mataas ang cross-reactivity ng mga species sa hindi direktang paraan.
Ano ang Mga Pagkakatulad sa pagitan ng Direktang at Di-tuwirang Immunofluorescence?
- Sila ay dalawang uri ng immunofluorescence technique.
- Ang mga pangunahing antibodies at fluorophore ay kasama sa parehong pamamaraan.
- Gayundin, ang reaksyon ng antigen-antibody ay nangyayari sa parehong pamamaraan.
- Higit pa rito, ang direkta at hindi direktang immunofluorescence ay gumagamit ng fluorescence microscope para sa pagtuklas ng antigen.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Direkta at Di-tuwirang Immunofluorescence?
Ang Immunofluorescence ay maaaring direkta o hindi direkta batay sa fluorophore conjugation sa mga antibodies na ginamit. Sa direktang immunofluorescence, ang fluorophore ay nakikipag-ugnay sa pangunahing antibody, na siyang nag-iisang antibody na kasama sa pamamaraang ito. Sa kaibahan doon, sa hindi direktang immunofluorescence, ang fluorophore ay nakikipag-ugnay sa pangalawang antibody, na isa sa dalawang uri ng antibodies na kasangkot sa pamamaraan. Samakatuwid, ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng direkta at hindi direktang immunofluorescence ay ang uri ng antibody na nakikipag-ugnay sa fluorophore.
Ang sumusunod na infographic ay nagbibigay ng magkatabing paghahambing ng pagkakaiba sa pagitan ng direkta at hindi direktang immunofluorescence.
Buod – Direkta vs Hindi Direktang Immunofluorescence
Ang Immunofluorescence ay isang pamamaraan na ginagamit upang makita ang pagkakaroon ng mga partikular na antigen sa isang sample. Ang pamamaraan na ito ay gumagamit ng mga tiyak na antibodies. Samakatuwid, sa ito, ang mga antibodies ay nakikipag-ugnay sa mga fluorophores upang makita ang mga ito gamit ang isang fluorescent microscope. Bukod dito, mayroong dalawang uri ng immunofluorescence lalo, direkta at hindi direktang immunofluorescence. Ang direktang immunofluorescence ay nagsasangkot ng isang solong antibody at fluorophore na direktang pinagsama sa antibody na ito. Ang hindi direktang immunofluorescence ay nagsasangkot ng dalawang antibodies; pangunahin at pangalawa at fluorophore conjugated sa pangalawang antibody. Dahil ang ilang mga pangalawang antibodies ay maaaring magbigkis sa isang pangunahing antibody at ilang mga fluorophores ay maaaring mag-conjugate sa mga pangalawang antibodies, ang hindi direktang immunofluorescence ay isang mas sensitibong pamamaraan kaysa sa direktang pamamaraan. Higit pa rito, ang hindi direktang pamamaraan ay mas mura kaysa sa direktang pamamaraan. Kaya, ito ang pagkakaiba sa pagitan ng direkta at hindi direktang immunofluorescence.
