Mahalagang Pagkakaiba – Direkta vs Hindi Direktang ELISA
Ang enzyme-linked immunoassay (ELISA), na kilala rin bilang enzyme immunoassay, ay isang serological test na tumutuklas ng mga antibodies sa dugo. Ito ay ginagamit bilang isang diagnostic tool upang malaman kung ang pasyente ay nalantad sa isang partikular na uri ng virus o isa pang nakakahawang ahente (antigen) at kung ang katawan ay gumawa ng mga antibodies laban sa impeksyon. Makikilala rin ng ELISA ang nakaraan at kasalukuyang mga impeksyon. Samakatuwid, ang ELISA ay kadalasang ginagamit bilang isang prescreening test ng mga doktor bago ang malalim na pagsusuri ng mga sakit. Ang pagsusuring ito ay maaaring gawin sa laboratoryo sa pamamagitan ng pagkuha ng sample ng dugo mula sa pasyente. Mayroong dalawang uri ng pagsusulit sa ELISA: direktang ELISA at hindi direktang ELISA. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng direkta at hindi direktang ELISA ay ang hindi direktang ELISA ay mas sensitibo at nangangailangan ng pagdaragdag ng pangalawang antibody habang ang direktang ELISA ay hindi gaanong sensitibo at gumagamit lamang ng pangunahing antibody.
Ano ang Direct ELISA?
Ang ELISA ay isang pagsusuri sa diagnostic ng sakit na isinagawa upang matukoy ang pagkakaroon ng mga partikular na antigen o antibodies sa dugo. Ginagawa ito bilang isang plate assay. Gumagamit ito ng mga antibodies na nauugnay sa madaling masuri na mga enzyme. Ang presensya ng mga antigen sa sample ng serum ay nagbubuklod sa mga tiyak na antibodies na nauugnay sa mga enzyme. Sa huling hakbang, ang isang tiyak na substrate ay idinagdag upang tumugon sa enzyme. Kino-convert ng enzyme ang substrate sa isang kulay o produkto na gumagawa ng signal. Ang pagbabago ng kulay sa substrate ng kemikal ay nagpapakita ng pagkakaroon ng isang partikular na antibody sa sample ng serum. Ang direktang pagsusuri sa ELISA ay gumagamit lamang ng isang pangunahing antibody na naka-link sa enzyme. Sa pagbubuklod sa antigen, mabilis itong nagbabago ng kulay, na nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng nakakahawang ahente sa dugo. Gayunpaman, ang intensity ng mga signal ay mas mahina sa direktang ELISA dahil ang mga epitope ay limitado sa pagbubuklod ng mga antigens. Kaya, ang direktang ELISA ay hindi gaanong sensitibo kumpara sa hindi direktang ELISA.
Figure 01: Direktang ELISA Test
Ano ang Indirect ELISA?
Maaaring isagawa ang ELISA gamit ang dalawang uri ng antibodies na; pangunahing antibody at pangalawang antibody. Ang hindi direktang ELISA tool ay gumagamit ng parehong uri ng antibodies upang palakasin ang mga signal para sa mas mahusay na pagtuklas. Ang hindi direktang pamamaraan ng ELISA ay isinasagawa bilang mga sumusunod.
- Ang mga plato ay inilubog ng mga antigen at hinuhugasan upang harangan ang hindi tiyak na pagbubuklod.
- Pagkatapos ay idinaragdag at hinuhugasan ang mga pangunahing antibodies.
- Enzyme-linked secondary antibody ay idinaragdag at hinugasan.
- May idinagdag na substrate at pinapayagang mag-react sa mga enzyme.
- Natukoy ang mga signal, at natukoy ang presensya o kawalan ng partikular na antigen sa sample.
Sa hindi direktang pagsusuri sa ELISA, maraming pangalawang antibodies ang maaaring magbigkis sa isang pangunahing antibody. Ang mga pangalawang antibodies ay nauugnay sa madaling masuri na mga enzyme. Samakatuwid, ang isang pagbubuklod ay maaaring gumawa ng malakas na signal dahil sa higit sa isang pakikipag-ugnayan. Samakatuwid, ang hindi direktang ELISA ay mas sensitibo kaysa sa direktang ELISA. Gayunpaman, ang hindi direktang ELISA ay maaaring gumawa ng mga hindi tiyak na signal dahil sa mga cross reaction ng pangalawang antibodies.
Figure 02: Indirect ELISA Test
Ano ang pagkakaiba ng Direkta at Di-tuwirang ELISA?
Direkta vs Hindi Direktang ELISA |
|
| Direktang ELISA ay hindi gaanong sensitibo kumpara sa hindi direktang ELISA. | Ang hindi direktang ELISA ay mas sensitibo. |
| Oras na Kinuha | |
| Ang direktang ELISA test ay isang mabilis na proseso. | Ang hindi direktang ELISA ay nakakaubos ng oras. |
| Paggamit ng Antibodies | |
| Isang uri lang ng antibodies (Pangunahing antibodies) ang ginagamit sa direktang ELISA. | Ang pangunahin at pangalawang antibodies ay ginagamit para sa hindi direktang ELISA. |
| Link sa Enzymes | |
| Ang mga pangunahing antibodies ay nauugnay sa mga enzyme. | Ang mga pangalawang antibodies ay nauugnay sa mga enzyme. |
| Cross-Reactivity ng Second Antibodies | |
| Ang direktang ELISA ay nag-aalis ng cross-reactivity ng pangalawang antibodies. | Hindi direktang ELISA ay apektado ng cross-reactivity ng pangalawang antibodies. |
| Signals | |
| Mahina ang mga signal kumpara sa hindi direktang ELISA. | Ang mga signal ay pinalakas sa hindi direktang ELISA. Kaya, madali itong matukoy. |
Buod – Direkta vs Hindi Direktang ELISA
Ang ELISA ay isang biochemical technique na pangunahing ginagamit sa immunology para makita ang pagkakaroon ng antibody o antigen sa sample ng dugo ng isang pasyente. Maaari itong isagawa sa pamamagitan ng dalawang proseso na kilala bilang direkta o hindi direktang ELISA. Ang direktang ELISA test ay gumagamit lamang ng mga pangunahing antibodies upang makita ang antigen habang ang hindi direktang ELISA ay gumagamit ng parehong pangunahin at pangalawang antibodies. Sa direktang ELISA, ang mga pangunahing antibodies ay nilagyan ng label samantalang sa hindi direktang ELISA ang pangalawang antibodies ay may label. Ito ang pagkakaiba sa pagitan ng direkta at hindi direktang ELISA.
