Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng Elisa at Elispot ay ang Elisa ay isang enzyme-linked immunosorbent assay na tumutukoy sa kabuuang konsentrasyon ng mga secreted signaling protein, habang ang Elispot ay isang enzyme-linked immunosorbent assay na nakakakita ng mga indibidwal na cytokine-secreting cell.
Ang Elisa at Elispot ay dalawang enzyme-linked immunosorbent assay na malawakang ginagamit sa medisina, patolohiya ng halaman, biotechnology at iba't ibang industriya ng parmasyutiko. Sa mga pamamaraang ito, ang isang analyte ng protina ay nakita ng isang antibody na nakadirekta laban dito. Ang Elisa ay ang pinakasikat na enzyme-linked immunosorbent assay na ginagamit sa mga laboratoryo. Sa kabilang banda, ang Elispot ay isang enzyme-linked immunosorbent assay na hindi ginagamit sa halip na Elisa ngunit ginagamit bilang karagdagan sa Elisa sa mga laboratoryo.
Ano ang Elisa Assay?
Ang Elisa ay isang enzyme-linked immunosorbent assay na tumutukoy sa kabuuang konsentrasyon ng mga secreted signaling protein. Isa itong malawakang ginagamit na analytical biochemistry assay na unang inilarawan nina Engvall at Perlmann noong 1971. Gumagamit ang diskarteng ito ng solid-phase na uri ng enzyme immunoassay upang matukoy ang pagkakaroon ng isang partikular na protina sa isang sample ng likido gamit ang mga antibodies na nakadirekta laban sa partikular na protinang ito. Ang assay na ito ay isang karaniwang ginagamit na diagnostic tool sa medisina, patolohiya ng halaman at biotechnology.
Mekanismo ng ELISA Test
Sa karamihan ng pagsusuri sa ELISA, ang hindi kilalang dami ng antigen ay hindi kumikilos sa isang solidong suporta (microlitre plate) sa simula. Pagkatapos ay inilapat ang tumutugmang pangunahing antibody sa ibabaw ng solidong suportang ibabaw. Ang antibody na ito ay bumubuo ng isang complex na may antigen (antigen-antibody complex). Ang antigen bound primary antibody ay maaaring makita ng pangalawang antibody na naka-link sa isang enzyme sa pamamagitan ng bioconjugation. Sa huling hakbang ng pagsubok sa Elisa, isang sangkap na naglalaman ng substrate ng enzyme ay idinagdag. Kung mayroong wastong pagbubuklod ng isang pangunahing antibody sa antigen, ang isang nakikitang pagbabago ng kulay ay ginawa ng substrate. Sa huli, binibilang nito ang antigen sa sample.
Figure 01: Iba't ibang Uri ng Elisa
Higit pa rito, may iba't ibang approach kay Elisa, gaya ng direct Elisa at indirect Elisa. Sa kasalukuyan, ginagamit ang iba't ibang mga pagsubok sa Elisa para makita ang mga pathogen ng tao tulad ng Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, hepatitis B virus, hepatitis C virus, enterotoxin na gumagawa ng E.coli, HIV, at SARS-CoV-2.
Ano ang Elispot Assay?
Ang Elispot ay isang enzyme-linked immunosorbent assay na nakakakita ng mga indibidwal na cytokine-secreting cell. Unang inilarawan ni Cecil Czerkinsky ang ELISpot noong 1983. Ito ay isang uri ng assay na nakatuon sa dami ng pagsukat sa dalas ng pagtatago ng cytokine para sa isang cell. Ito rin ay inuri bilang isang pamamaraan na gumagamit ng mga antibodies upang makita ang isang biological o kemikal na analyte ng protina. Ang Fluorospot assay ay isang variation ng Elispot assay, na gumagamit ng fluorescence upang pag-aralan ang maramihang analyte (mas malihim na mga protina).
Mechanism of Elispot Test
Sa mekanismong ito, ang cytokine specific monoclonal antibodies ay idinaragdag sa mga balon ng microlitre plate sa simula. Pagkatapos ang nais na mga cell na sinusunod ay idinagdag sa mga balon. Sa paglaon, ang mga cell ay incubated. Sa panahon ng cell incubation, ang mga cell ay pinapayagang tumugon sa anumang stimuli at mag-secrete ng cytokine. Ang mga cytokine na na-secret ng mga incubated na cell ay makakabit sa mga antibodies dahil ang mga cell ay napapalibutan ng cytokine specific monoclonal antibodies.
Figure 02: Elispot Assay
Para makita ang mga cytokine specific monoclonal antibodies na ito, idinaragdag ang biotinylated specific detection antibodies sa balon. Kinukuha ng biotinylated specific detection antibodies ang cytokine specific monoclonal antibodies sa mga balon. Bukod dito, ang streptavidin-enzyme conjugates ay idinagdag sa mga balon upang magbigkis sa mga antibodies sa pagtuklas. Sa huling hakbang, ang mga tiyak na substrate ay idinagdag sa mga balon. Ang mga reaksyon ng enzyme conjugates at substrates ay gumagawa ng mga natatanging spot sa mga balon. Ang mga natatanging spot na ito ay binabasa sa isang awtomatikong ELISpot reader. Sa huli, kakalkulahin pa nito ang dalas ng pagtatago ng cytokine.
Ano ang Pagkakatulad sa pagitan ni Elisa at Elispot?
- Sila ay parehong enzyme-linked immunosorbent assays.
- Ang parehong mga pagsusuri ay nakakatuklas ng mga partikular na analyte ng protina.
- Ang mga pagsusuring ito ay gumagamit ng mga partikular na antibodies upang matukoy ang mga analyte ng protina.
- Ang parehong assay ay gumagamit ng mga enzyme at substrate.
- Ginagamit ang mga ito bilang diagnostic tool sa mga medikal na laboratoryo.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ni Elisa at Elispot?
Ang Elisa ay isang enzyme-linked immunosorbent assay na tumutukoy sa kabuuang konsentrasyon ng mga secreted signaling protein. Sa kabilang banda, ang Elispot ay isang enzyme-linked immunosorbent assay na sumusukat sa mga indibidwal na cytokine secreting cells. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng Elisa at Elispot. Bukod dito, sa pagsubok sa Elisa, ang antigen ay unang hindi kumikilos sa mga balon ng microlitre. Sa kabaligtaran, sa pagsubok ng Elispot, ang antibody ay unang hindi kumikilos sa mga balon ng microlitre. Kaya, ito ay isa pang pagkakaiba sa pagitan ni Elisa at Elispot.
Ang infographic sa ibaba ay nagpapakita ng detalyadong pagsusuri ng pagkakaiba sa pagitan ng Elisa at Elispot sa tabular form.
Buod – Elisa vs Elispot
Ang Elisa at Elispot ay dalawang enzyme-linked immunosorbent assay na malawakang ginagamit sa medisina, patolohiya ng halaman, biotechnology, at iba't ibang industriya ng parmasyutiko. Nakita ni Elisa ang pagkakaroon ng ligand (protina) sa isang sample ng likido gamit ang mga antibodies na nakadirekta laban sa ligand na susukatin. Ang Elispot assay ay isang malawakang ginagamit na paraan para sa pagsubaybay sa mga tugon ng immune. Nakikita nito ang mga indibidwal na cytokine secreting cells gamit ang mga antibodies. Ito ay parehong immunoassay at bioassay technique. Kaya, ito ang buod ng pagkakaiba ng Elisa at Elispot.
