Mahalagang Pagkakaiba – Lumilipas kumpara sa Stable na Paglipat
Ang Transfection ay isang proseso na kasangkot sa paglipat ng gene ng mga eukaryotic cell gamit ang kemikal o pisikal na pamamaraan. Ang paglipat ay maaaring uriin sa pangunahing dalawang uri na pinangalanang transient transfection at stable transfection. Sa panahon ng transient transfection, ang gene ng interes ay nabigo na sumanib sa host genome at ipinahayag pansamantala sa loob ng host para sa isang maikling panahon samantalang, sa stable transfection, ang gene ng interes ay sumasama sa host genome at pinananatili sa loob ng mahabang panahon sa ilang henerasyon.. Ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng lumilipas at matatag na paglipat. Sa parehong mga kaso, matagumpay ang paglipat, at ipinahayag ang mga gene.
Ano ang Transient Transfection?
Ang Transfection ay isang mahalagang tool para sa pagpasok ng mga gene sa mga eukaryotic cell. Kabilang sa dalawang uri ng paglipat, ang lumilipas na paglipat ay isang karaniwang paraan sa paglipat ng gene. Sa pamamagitan ng isang vector, ang mga dayuhang gene ay nababago sa loob ng mga host cell. Sa sandaling pumasok ang dayuhang DNA sa host cell, mayroon itong dalawang opsyon. Maaari itong isama sa host genome at magtiklop, o manatili sa loob nang hindi sumasama sa genome. Ang transient transfection ay nagpapakita ng pansamantalang pagpapahayag ng mga nakapasok na genes nang hindi sumasama sa host genome. Ang mga gene ay nagpapahayag at gumagawa ng naka-code na protina hanggang sa hatiin ang cell. Gayunpaman, dahil sa kawalan ng kakayahan ng pagsasama, hindi ito maaaring magtiklop at pumasok sa mga susunod na henerasyon. Ang ganitong uri ng paglipat ay matagumpay sa maikling panahon. Sa panahon ng paghahati ng cell o dahil sa ilang iba pang mga kadahilanan, ang dayuhang DNA ay napapailalim sa pagkasira. Ang transient transfection ay ipinapakita kapag ang dayuhang DNA ay nasa anyo ng mataas na nakapulupot na DNA.
Figure 01: Lumilipas na Paglipat
Ano ang Stable Transfection?
Ang matatag na paglipat ay nagpapakita ng matagumpay na pagsasama ng dayuhang gene sa host genome. Kapag ang dayuhang DNA ay pumasok sa loob ng host cell, ang bahagi ng dayuhang DNA ay sumasama sa host genome at naging bahagi nito. Kaya naman, ang dayuhang DNA ay nagre-replicate din at pumasa sa mga susunod na henerasyon kapag ang host genome ay nag-replicate. Ang ganitong uri ng paglipat ay kumplikado at bihira. Gayunpaman, dahil sa matatag na paglipat sa genome, ang katangiang ito ay nananatili sa mas mahabang panahon ng ilang henerasyon.
Ang matatag na paglipat ay isang mahirap na proseso at nangangailangan ng epektibong paghahatid ng DNA at pagkuha ng cell ng dayuhang DNA sa genome nito. Samakatuwid, pinapaboran ng linear na DNA ang matatag na paglipat kaysa sa pabilog na DNA. Gayunpaman, ang stable na transfection rate ay humigit-kumulang isa sa 104 transformed cell. Ang matatag na paglipat ay maaaring maobserbahan sa pamamagitan ng cotransfomation ng isang mapipiling marker at pagsasagawa ng artipisyal na pagpili sa isang medium.
Figure 02: Stable Transfection
Ano ang pagkakaiba ng Transient at Stable Transfection?
Transient vs Stable Transfection |
|
| Ang dayuhang DNA ay hindi sumasama sa isang host genome. | Ang dayuhang DNA ay sumasama sa host genome at nagiging bahagi nito. |
| Replikasyon sa loob ng Host | |
| Transiently transfected genes ay hindi gumagaya sa loob ng host. Samakatuwid, ang mga gene ay hindi naipapasa sa mga susunod na henerasyon. | Ang mga gene ay ginagaya sa loob ng host at ipinapasa sa mga susunod na henerasyon. |
| Tagal ng oras ng Gene Expression | |
| Ang mga gene ay ipinahayag para sa isang may hangganang yugto ng panahon at pagkatapos nito, ang mga ito ay pupuksain. | Ang mga gene ay naging bahagi ng genome at ipinahayag sa loob ng henerasyon sa mahabang panahon. |
| Gamitin | |
| Ito ay kapaki-pakinabang para sa pag-aaral ng mga epekto ng panandaliang pagpapahayag ng mga gene o mga produkto ng gene. | Ito ay kapaki-pakinabang para sa pag-aaral ng mga epekto ng mga gene expression sa mahabang panahon. |
| Detection of the Transfection | |
| Ang mga gene ay ipinahayag at madaling matukoy sa pamamagitan ng paglalagay ng reporter gene. | Madaling matukoy ang stable na paglipat sa pamamagitan ng paglalagay ng mapipiling marker at pagpili sa pamamagitan ng artipisyal na pagpili sa media. |
| Pangyayari at Proseso | |
| Ang transient transfection ay karaniwan at hindi mahirap gawin. | Ang matatag na paglipat ay bihirang mangyari at mahirap gawin. |
| Kalikasan ng DNA | |
| Ang mataas na supercoiled na DNA ay angkop para sa transient transfection. | Ang linear DNA ay angkop para sa stable transfection. |
| Application | |
| Ginagamit ito para sa mga pag-aaral ng gene knockdown o silencing na may mga inhibitory RNA, paggawa ng protina sa maliit na sukat | Ginagamit ito para sa paggawa ng protina sa malakihan, mas matagal na pag-aaral sa pharmacology, gene therapy, pananaliksik sa mga mekanismo ng pangmatagalang genetic regulation |
Buod – Lumilipas vs Stable na Paglipat
Ang mga transient at stable na transfections ay dalawang uri ng transfections na ipinapakita sa panahon ng paglilipat ng gene sa mga eukaryotic cell ng mga non-viral based system. Ang binagong dayuhang DNA ay hindi isinama sa host genome sa transient transfection habang ito ay isinasama sa host genome sa stable transfection. Ang circular coiled DNA ay ipinapakita na lumilipas na paglipat samantalang ang linear na DNA ay mas pinipili ang matatag na paglipat. Ito ang pagkakaiba sa pagitan ng transient at stable na paglipat. Gayunpaman, ang transient transfection ay mas karaniwan at madali kumpara sa stable transfection. Ngunit ang pagpili ng isa sa dalawa ay nakasalalay sa layunin ng paglipat ng gene at tagal ng proyekto ng pananaliksik.
