Mahalagang Pagkakaiba – Nitrocellulose kumpara sa Nylon Membrane
Ang Blotting ay isang mahalagang pamamaraan para sa pag-detect ng mga partikular na sequence ng DNA, RNA, at mga protina mula sa kanilang mga mixture sa molecular biology. Ginagawa ito gamit ang isang lamad na tinatawag na blot. Mayroong iba't ibang mga pamamaraan ng blotting tulad ng northern, southern at western blotting. Ang pagpili ng wastong lamad para sa proseso ng blotting ay dapat na maingat na gawin upang maiwasan ang hindi tiyak na pagbubuklod at mga maling pagtuklas. Ang Nitrocellulose, nylon, at PVDF ay karaniwang ginagamit na mga lamad sa mga pamamaraan ng blotting. May iba't ibang katangian sila. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng nitrocellulose at nylon membrane ay ang mga lamad ng nitrocellulose ay may mataas na potensyal na immobilization ng protina samantalang ang mga lamad ng nylon ay may mataas na potensyal na immobilization ng nucleic acid. Gayunpaman, ang parehong uri ng lamad ay madalas na ginagamit sa mga pamamaraan ng blotting.
Ano ang Nitrocellulose Membrane?
Ang Nitrocellulose membrane ay isang karaniwang ginagamit na filter ng lamad sa mga pamamaraan ng nucleic acid at protein blotting. Ito ay may mataas na potensyal na nagbubuklod ng protina. Samakatuwid, ang mga lamad ng nitrocellulose ay malawakang ginagamit sa pamamaraan ng western blotting. Ang mga lamad ng nitrocellulose ay katugma sa lahat ng mga diskarte sa hybridization at nagpapakita ng higit na mahusay na mga kapasidad na nagbubuklod nang walang mga interferences. Ang mga lamad ng Nitrocellulose ay likas na hydrophilic. Gumagawa sila ng hydrophilic na pakikipag-ugnayan sa mga molekula at mahusay na nagpapawalang-kilos sa kanila sa lamad. Available ang mga komersyal na nitrocellulose membrane sa dalawang laki ng butas: 0.45 at 0.2 µm.
Figure 01: Nitrocellulose membrane na ginamit sa western blotting
Ano ang Nylon Membrane?
Ang Nylon membrane ay isa pang uri ng commercial membrane na ginagamit sa mga diskarte sa blotting. Ito ay alternatibong ginagamit kasama ng nitrocellulose membranes para sa southern at northern blotting. Ang mga lamad ng nylon ay mainam para sa southern blotting kaysa sa nitrocellulose dahil sa kanilang mataas na pagkakaugnay sa pagbubuklod sa DNA. Dahil sa ilang natatanging katangian ng nylon membranes, ang mga mananaliksik ay karaniwang gumagamit ng nylon membranes para sa southern at northern blotting sa halip na sa nitrocellulose membrane. Inirerekomenda din ang mga naylon membrane para sa paghuhubad at pag-reprobing, hindi katulad ng nitrocellulose.
Figure 02: Nylon membrane na ginagamit para sa southern blotting
Ano ang pagkakaiba ng Nitrocellulose at Nylon Membrane?
Nitrocellulose vs Nylon Membrane |
|
| Ang nitrocellulose membrane ay malutong. | Ang mga naylon membrane ay hindi gaanong malutong. |
| Handling | |
| Mahirap silang hawakan. | Madaling hawakan ang mga ito. |
| Reprobing | |
| Ang hindi sinusuportahang nitrocellulose membrane ay mahirap i-reprobe. | Madali ang reprobing gamit ang nylon membranes. |
| Pagiging tugma sa Iba't ibang Kundisyon ng Storage | |
| Ang mga lamad ng nitrocellulose ay may mas kaunting lakas upang makayanan ang iba't ibang kondisyon ng imbakan. | Ang mga lamad ng nylon ay tumutugon nang mas matatag sa iba't ibang kondisyon ng imbakan. |
| Gamitin | |
| Kinakailangan ang prewetting. | Hindi kailangan ang prewetting para sa mga nylon membrane. |
| Hydrophilic na Kalikasan | |
| Ang mga nitrocellulose membrane ay hydrophilic sa kalikasan ngunit hindi gaanong hydrophilic kaysa sa mga nylon membrane. | Ang mga ito ay lubos na hydrophilic sa kalikasan. |
| Potensyal na Immobilization | |
| Nitrocellulose membranes ay may mas kaunting affinity para sa mga nucleic acid. Ngunit ito ay may mataas na affinity para sa mga protina. | Ang mga nylon membrane ay may mataas na potensyal na nagbubuklod sa mga nucleic acid kaysa sa mga nitrocellulose membrane. |
Buod – Nitrocellulose vs Nylon Membrane
Ang Nitrocellulose at nylon membranes ay mga espesyal na sheet na ginagamit sa blotting technique upang kopyahin ang banding pattern sa gel. Pinapagana nila ang posibilidad ng pag-detect ng isang tiyak na pagkakasunud-sunod o isang protina mula sa mga mixtures sa pamamagitan ng pag-immobilize sa kanila sa lamad. Kapag ang mga molekula ay hindi kumikilos sa lamad, maaari itong magamit bilang isang substrate para sa pagsusuri ng hybridization na may mga label na probes. Ang nitrocellulose membrane ay karaniwang ginagamit para sa pagtuklas ng protina sa western blotting technique dahil sa mataas na pagkakaugnay nito sa mga protina. Ang mga lamad ng naylon ay kadalasang ginagamit para sa southern at northern blotting. Ito ang pagkakaiba sa pagitan ng nitrocellulose at nylon membrane.
