Mahalagang Pagkakaiba – Nitrocellulose kumpara sa PVDF
Ang Western blotting ay isang paraan na nagbibigay-daan sa pag-detect at pag-quantification ng mga partikular na protina mula sa sample ng protina. Ang pagiging maaasahan ng pamamaraan ay nakasalalay sa pagpili ng isang tamang lamad para sa pagsipsip ng mga protina mula sa gel. Mayroong iba't ibang uri ng microporous membrane. Ang mga lamad ng Nitrocellulose at PVDF ay dalawang ganoong lamad na ginusto ng mga mananaliksik dahil sa kanilang mga espesyal na katangian sa iba pang mga uri ng lamad. Ang pagpili sa pagitan ng nitrocellulose o PVDF ay isa pang hamon sa western blotting. Ang parehong nitrocellulose at PVDF ay may mataas na kapasidad ng pagsipsip ng protina. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng nitrocellulose at PVDF membrane ay ang mga nitrocellulose membrane ay walang kakayahan na tanggalin ang mga antibodies at muling gamitin ang lamad para sa antibody reprobing habang ang PVDF membranes ay may kakayahan sa paghuhubad at muling paggamit.
Ano ang Nitrocellulose?
Ang Nitrocellulose ay isang polymer na ginawa sa pamamagitan ng paggamot sa cellulose na may nitric acid at ginagamit upang gumawa ng microporous membranes sa molecular biology, lalo na para sa mga diskarte sa blotting tulad ng southern, northern at western blotting. Ang laki ng butas ng nitrocellulose membrane ay mula 3 hanggang 20 µm. Ang mga nitrocellulose microporous membrane ay nagpapadali sa pagtuklas ng immunochemical reaction na nangyayari sa ibabaw ng lamad. Samakatuwid, ang mga lamad ng nitrocellulose ay madalas na ginagamit para sa immobilization ng mga protina at pagtuklas ng mga tiyak na protina sa western blotting. Ang mga nitrocellulose membrane ay maaari ding mag-immobilize ng mga glycoprotein at nucleic acid.
Nitrocellulose membranes ay mas gusto sa lateral flow assays dahil sa ilang feature. Ang mga lamad ng nitrocellulose ay sumisipsip ng mga protina sa isang mataas na konsentrasyon. Ang solvent na ginamit upang mabasa ang lamad ay hindi nakakabawas sa pagsipsip ng protina ng nitrocellulose membrane. Ang mga lamad ng nitrocellulose ay madaling maputol sa nais na laki ng gel at ilipat ang mga protina mula sa gel patungo sa lamad sa pamamagitan ng electric o capillary transfer. Pinapayagan ng Nitrocellulose ang mas mabilis na daloy ng mga protina sa pamamagitan ng lamad na may mataas na potensyal na nagbubuklod. Ang Nitrocellulose ay nagpapakita ng pinahusay na lakas ng paghawak. Ang isa pang espesyal na katangian ng nitrocellulose membrane ay madali itong idikit ng mga non-solvent water resistant adhesives sa iba't ibang plastic backing.
Figure 01: Nitrocellulose membrane para sa western blotting
Ano ang PVDF?
Ang Polyvinylidene difluoride (PVDF) ay fluoropolymer na ginawa ng polymerization ng vinylidene difluoride at may mataas na kakayahan sa immobilization ng mga protina. Samakatuwid, ang mga microporous membrane na ginawa mula sa PVDF ay ginagamit sa western blotting techniques upang pag-aralan ang mga partikular na protina mula sa mga pinaghalong protina. Ang mga lamad ng PVDF ay maaari ding gamitin para sa pagsusuri ng amino acid at pagkakasunud-sunod ng protina. Ang pinakamahalagang katangian ng PVDF membrane sa ibabaw ng nitrocellulose membrane ay madali itong matanggal ang mga antibodies at muling magamit para sa mga susunod na antibody probes.
PVDF membranes ay mas makapal kaysa nitrocellulose membranes; samakatuwid, mas lumalaban sa mga pinsala sa panahon ng muling paggamit. Ang mga lamad ng PVDF ay lubos na hydrophobic. Samakatuwid, dapat silang ibabad sa methanol o isopropanol bago gamitin.
Ano ang pagkakaiba ng Nitrocellulose at PVDF?
Nitrocellulose vs PVDF |
|
| Nitrocellulose ay isang polymer na binubuo ng cellulose. | Ang PVDF ay isang fluoropolymer na ginawa ng polymerization ng vinylidene difluoride. |
| Laki ng Porma ng Membrane | |
| Ang mga karaniwang laki ng butas ay 0.1, 0.2 o 0.45μ | Ang mga karaniwang laki ng butas ay 0.1, 0.2 o 0.45μm |
| Protein Binding Capacity | |
| Nitrocellulose ay may protina na nagbubuklod na kapasidad na 80 hanggang 100 μg/cm2. | PVDF ay may protein binding capacity na 170 hanggang 200 μg/cm2. |
| Sensitivity | |
| May mababang sensitivity ito kumpara sa PVDF. | Ito ay may mataas na sensitivity. |
| Detection of Lowly Expressed Protein | |
| Dahil ang sensitivity ay mababa sa nitrocellulose membranes, hindi ito angkop para sa pagtuklas ng mababang ipinahayag na mga protina. | Ito ay mas angkop para sa pagtuklas ng mga lowly expressed proteins dahil sa mataas na sensitivity nito. |
| Background Ingay | |
| Ito ay may mas mababang ingay sa background | Ito ay may mas mataas na ingay sa background. |
| Mga Pakikipag-ugnayan sa Mga Protina | |
| Ang mga molekula ng protina ay nagbubuklod sa mga lamad ng nitrocellulose sa pamamagitan ng mga hydrophobic na pakikipag-ugnayan. | Nagbubuklod ang mga protina sa mga lamad ng PVDF sa pamamagitan ng hydrophobic at dipole na pakikipag-ugnayan. |
| Nature of the Membrane | |
| Nitrocellulose ay malutong at marupok. Gayunpaman, available ang mga bersyon ng nitrocellulose, at lumalaban ang mga ito. | PVDF ay mas matibay at may mas mataas na chemical resistance. |
| Ability to Strip and Reuse | |
| Maaaring nahihirapan ang nitrocellulose sa paghuhubad at pag-reprobing nang hindi nawawala ang signal. | Ang PVDF ay mainam para sa reprobing at sequencing application. |
| Suitability | |
| Ang Nitrocellulose ay mainam para sa pag-detect ng mababang molekular na timbang na protina. | Ang PVDF ay mas angkop para sa pag-detect ng mas mataas na molekular na timbang na protina. |
| Iba pang Gamit | |
| Ang Nitrocellulose ay maaaring gamitin para sa pagsusuri ng nucleic acid at dot/slot blotting. | PVDF ay maaaring gamitin para sa sequencing ng protina at solid phase assay system. |
| Gastos | |
| Mas mura ito kaysa sa PVDF membranes. | Mas mahal ito kaysa sa nitrocellulose membranes. |
| Kailangan para sa Pre-wetting | |
| Ang mga lamad ng nitrocellulose ay hindi nangangailangan ng presoaking na may methanol | Ang mga lamad ng PVDF ay nangangailangan ng presoaking na may methanol. |
Buod – Nitrocellulose vs PVDF
Ang Nitrocellulose membrane ay ang mga unang lamad na ginamit sa komersyo para sa lateral flow assay. Mayroon silang mataas na kapasidad para sa pagsipsip ng mga protina. Samakatuwid, ang mga lamad ng nitrocellulose ay ginagamit sa western blotting. Ang PVDF ay isa pang uri ng lamad na ginagamit sa western blotting at mayroon din itong mataas na kapasidad sa pagsipsip ng protina. Ang parehong mga uri ay ginagamit sa western blotting para sa pagsusuri ng protina. Gayunpaman, ang mga lamad ng PVDF ay may mas espesyal na mga katangian, na ginagawang mas angkop ang mga ito kaysa sa mga lamad ng nitrocellulose para sa western blotting. Ngunit, ang mga lamad ng nitrocellulose ay mas angkop para sa pag-detect ng mga mababang molekular na timbang na protina, ang mga lamad ng PVDF ay mas angkop para sa pag-detect ng mataas na molekular na timbang na mga protina. Ito ang pagkakaiba sa pagitan ng nitrocellulose at PVDF membranes.
