Mahalagang Pagkakaiba – Pahina ng SDS vs Western Blot
Ang Western blotting ay isang pamamaraan na nakakakita ng partikular na protina mula sa sample ng protina. Ang pamamaraang ito ay ginagawa sa pamamagitan ng ilang mahahalagang hakbang: gel electrophoresis, blotting, at hybridization. Ang sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS Page) ay isang uri ng gel electrophoresis technique na ginagamit upang paghiwalayin ang mga protina ayon sa kanilang mga sukat (molecular weights). Ang Western blot ay isang espesyal na sheet ng isang blotting membrane na ginagamit upang ilipat ang parehong pattern ng mga protina sa SDS Page. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng SDS Page at western blot ay ang SDS Page ay nagbibigay-daan sa paghihiwalay ng mga protina sa isang halo habang ang western blot ay nagbibigay-daan sa pagtuklas at pag-quantification ng isang partikular na protina mula sa isang timpla. Parehong kapaki-pakinabang sa pag-aaral ng pagsusuri sa protina.
Ano ang SDS Page?
Ang SDS Page ay isang gel electrophoresis technique na ginagamit para sa paghihiwalay ng protina. Ito ay karaniwang ginagamit sa biochemistry, genetics, forensics at molecular biology. Kapag ang mga protina ay nakuha mula sa sample, ang mga ito ay pinapatakbo sa isang gel na binubuo ng SDS at polyacrylamide. Ang SDS ay isang anionic detergent na ginagamit upang i-linearize ang mga protina (denature proteins) at upang magbigay ng negatibong singil sa mga linearized na protina na proporsyonal sa kanilang molekular na masa. Ang polyacrylamide ay nagiging solidong suporta para sa gel. Ang mga denatured protein na may negatibong singil ay lumilipat patungo sa positibong dulo ng apparatus sa pamamagitan ng gel. Ayon sa mga sukat ng mga protina, ang mga bilis ng paglipat ay naiiba sa mga protina at nangyayari ang paghihiwalay. Samakatuwid, ang pahina ng SDS ay kapaki-pakinabang para sa paghihiwalay ng mga indibidwal na protina batay sa kanilang mga sukat.
Ang paghahanda ng polyacrylamide gel para sa fractionation ng mga protina ay isang mahalagang hakbang sa SDS Page. Ang tamang konsentrasyon ng polyacrylamide at ang uri ng cross-linking agent na ginamit ay malakas na nakakaapekto sa mga pisikal na katangian ng gel, na gumagawa ng aktwal na paghihiwalay ng iba't ibang mga protina. Ang mga sukat ng butas ng butas ng gel ay dapat na maayos na pinamamahalaan para sa epektibong paghihiwalay. Gayunpaman, ang SDS Page ay itinuturing bilang isang high-resolution na diskarte sa paghihiwalay ng protina.
SDS Page technique ay may malaking limitasyon sa pagsusuri ng protina. Dahil ang SDS ay nagde-denature ng mga protina bago ang paghihiwalay, hindi nito pinapayagan ang pagtuklas ng aktibidad ng enzymatic, mga interaksyon na nagbubuklod ng protina, mga cofactor ng protina, atbp.
Figure 01: SDS Page
Ano ang Western Blot?
Western blotting technique ay nagbibigay-daan sa pagtuklas ng isang partikular na protina mula sa pinaghalong protina at pagsukat ng dami at molekular na timbang ng protina. Ang Western blot ay ang lamad na ginagamit sa panahon ng pamamaraan ng blotting upang makuha ang mirror image ng mga pattern ng protina sa SDS- polyacrylamide gel. Ang lamad na ginagamit para sa western blotting ay kadalasang binubuo ng nitrocellulose o polyvinylidene difluoride (PVDF). Ang lamad na may inilipat na protina ay maaaring gamitin upang matukoy ang nais na protina. Nangangailangan ito ng mataas na kalidad na antibody para sa pagtuklas ng nais na protina sa pamamagitan ng hybridization. Ang antibody ay nagbubuklod sa espesipikong antigen nito at nagpapakita ng pagkakaroon ng ninanais na antigen na isang protina.
Ang paglilipat ng mga protina mula sa SDS polyacrylamide gel patungo sa western blot ay ginagawa sa pamamagitan ng electroblotting. Ito ay isang mabisa at mabilis na paraan na nagiging sanhi ng electrophorese ng mga protina mula sa gel at pumasa sa nitrocellulose membrane (western blot).
Figure 02: Western Blot
Ano ang pagkakaiba ng SDS Page at Western Blot?
SDS Page vs Western Blot |
|
| Ang SDS Page ay isang gel electrophoresis technique. | Western blot ay isang pamamaraan na ginagawa sa isang lamad upang makita ang isang partikular na protina mula sa isang timpla. |
| Gamitin | |
| Ang SDS page ay nagbibigay-daan sa paghihiwalay ng mga protina ayon sa laki ng mga ito. | Western blot ay nagbibigay-daan sa paglilipat ng mga protina sa SDS page gel nang hindi binabago ang pattern nito at pinapayagan ang hybridization na may mga partikular na antibodies. |
| Mga Disadvantage | |
| Protein denaturation, mataas na halaga, at pagkakaroon ng neurotoxin chemicals ang mga disadvantages ng technique na ito. | Ang diskarteng ito ay nakakaubos ng oras at nangangailangan ng mahusay na karanasang personal at partikular na kinokontrol na mga kondisyon. |
Buod – SDS Page vs Western Blot
Ang SDS page at western blot ay dalawang paraan na kasangkot sa pagsusuri ng protina. Ang SDS Page ay nagbibigay-daan sa madaling paghihiwalay ng mga protina sa isang gel ayon sa kanilang molekular na timbang. Nakakatulong ang Western blot na kumpirmahin ang presensya at dami ng isang partikular na protina sa pamamagitan ng hybridization na may mga tiyak na antibodies. Ito ang pagkakaiba sa pagitan ng SDS Page at western blot.
