Mahalagang Pagkakaiba – Gel Electrophoresis vs SDS Page
Ang Gel electrophoresis ay isang pamamaraan na naghihiwalay sa mga macromolecule sa isang electrical field. Ito ay isang pangkaraniwang paraan sa Molecular biology upang paghiwalayin ang DNA, RNA at mga protina mula sa mga mixture ayon sa kanilang molekular na laki. Ang SDS Page ay isang uri ng gel electrophoresis na ginagamit upang paghiwalayin ang mga protina mula sa pinaghalong protina batay sa kanilang mga sukat. Ang gel electrophoresis ay isang terminong ginamit upang tukuyin ang normal na pamamaraan na inilapat para sa DNA, RNA, at paghihiwalay ng protina habang ang SDS Page ay isang uri ng gel electrophoresis. Ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng gel electrophoresis at SDS Page.
Ano ang Gel Electrophoresis?
Ang Gel electrophoresis ay isang karaniwang pamamaraan na ginagamit sa mga laboratoryo upang paghiwalayin ang mga naka-charge na molekula gaya ng DNA, RNA, mga protina, atbp. mula sa kanilang mga pinaghalong. Ang isang gel ay ginagamit sa gel electrophoresis. Ito ay gumaganap bilang isang molecular sieve. Mayroong dalawang uri ng gel na ginagamit sa gel electrophoresis katulad ng agarose at polyacrylamide. Ang pagpili ng paghahanda ng gel at gel ay mahalagang mga salik na dapat isaalang-alang sa mga electrophorese ng gel dahil ang laki ng butas ng gel ay dapat na maingat na manipulahin para sa isang mahusay na paghihiwalay ng mga molekula sa pamamagitan ng gel electrophoresis. Ang gel electrophoresis ay may electric field na konektado sa dalawang dulo ng gel. Ang isang dulo ng gel ay nagpapakita ng positibong singil habang ang kabilang dulo ay negatibong na-charge.
Ang DNA at RNA ay mga molekulang may negatibong charge. Kapag na-load ang mga ito sa gel mula sa negatibong dulo ng gel at inilapat sa electric field, lumilipat sila sa mga pores ng gel patungo sa positibong sisingilin na dulo ng gel. Ang bilis ng paglipat ay nakasalalay sa singil at laki ng molekula. Ang mas maliliit na molekula ay madaling lumilipat sa mga gel pores kaysa sa mas malalaking molekula. Samakatuwid, ang mas maliliit na molekula ay naglalakbay ng mahabang distansya sa pamamagitan ng gel at ang mas malalaking molekula ay naglalakbay sa isang maikling distansya. Upang obserbahan ang paglalakbay ng mga molekula sa gel, ginagamit ang mga espesyal na uri ng mga tina. Ang electric field ay inilapat para sa isang tiyak na tagal ng panahon at huminto upang maiwasan ang pagkawala ng mga molekula at upang panatilihin ang mga molekula sa kanilang mga nilakbay na posisyon. Ang iba't ibang mga banda ay maaaring maobserbahan sa gel. Ang mga banda na ito ay kumakatawan sa mga molekula ng iba't ibang laki. Kaya naman, ang gel electrophoresis ay kapaki-pakinabang upang pag-iba-ibahin ang mga molekula ayon sa kanilang mga sukat.
Ang gel electrophoresis ay isinasama sa iba't ibang mga diskarte bilang isang preparative technique sa Molecular biology tulad ng PCR, RFLP, cloning, DNA sequencing, southern blotting, genome mapping, atbp.
Figure 01: Agarose gel electrophoresis
Ano ang SDS Page?
Ang Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS Page) ay isang uri ng gel electrophoresis na ginagamit upang paghiwalayin ang mga protina. Kapag ang gel electrophoresis ay ginagamit upang paghiwalayin ang mga protina, kailangan ng mga espesyal na paggamot dahil ang mga protina ay hindi negatibong sinisingil tulad ng DNA at RNA at hindi lumilipat patungo sa positibong dulo o negatibong dulo. Samakatuwid, ang mga protina ay na-denatured at pinahiran ng negatibong singil bago ang gel electrophoresis. Ginagawa ito gamit ang isang detergent na tinatawag na sodium dodecyl sulfate (SDS). Ang gel electrophoresis na gumagamit ng SDS at isang polyacrylamide gel para sa sumusuportang medium ay kilala bilang SDS Page. Ang diskarteng ito ay karaniwang ginagamit sa biochemistry, genetics, forensics at molecular biology.
Sa panahon ng SDS Page, ang mga protina ay hinahalo sa SDS. Binubuksan ng SDS ang mga protina sa isang linear na hugis at pinahiran ang mga ito ng negatibong singil na proporsyonal sa kanilang molekular na masa. Dahil sa negatibong singil, ang mga molekula ng protina ay lumilipat patungo sa dulo ng positibong singil ng gel at naghihiwalay ayon sa kanilang mga molekular na masa. Sa SDS Page, ginagamit ang polyacrylamide bilang solidong suporta para sa gel. Ang aktwal na paghihiwalay ng mga protina ay higit sa lahat ay nakasalalay sa mga katangian ng gel. Samakatuwid, ang paghahanda ng polyacrylamide gel ay dapat na maingat na gawin at ang tamang konsentrasyon ng polyacrylamide ay dapat gamitin. Ang mga polyacrylamide gel ay nagpapakita ng mataas na resolution kaysa sa agarose gels. Samakatuwid, ang SDS Page ay itinuturing na isang high-resolution na diskarte para sa paghihiwalay ng protina.
Ang SDS Page ay isang uri ng denaturing gel electrophoresis. Ito ay may malaking limitasyon sa pagsusuri ng protina. Dahil ang SDS ay nagde-denature ng mga protina bago ang paghihiwalay, hindi nito pinapayagan ang pagtuklas ng aktibidad ng enzymatic, mga interaksyon na nagbubuklod ng protina, mga cofactor ng protina, atbp.
Figure 02: SDS page
Ano ang pagkakaiba ng Gel Electrophoresis at SDS Page?
Gel Electrophoresis vs SDS Page |
|
| Ang gel electrophoresis ay isang paraan na ginagawa upang paghiwalayin ang mga macromolecule gamit ang isang electric field. | Ang SDS Page ay isang high-resolution na gel electrophoresis technique na ginagamit upang paghiwalayin ang mga protina batay sa kanilang masa. |
| Gel Run | |
| Maaari itong isagawa sa pahalang o patayong paraan. | SDS Page ay palaging tumatakbo nang patayo. |
| Batayan para sa Paghihiwalay | |
| Ang paghihiwalay ay nangyayari ayon sa singil at laki. | Ang paghihiwalay ng protina ay nangyayari ayon sa masa at singil. |
| Resolution | |
| Ang agarose gel electrophoresis ay may mababang resolution at ang polyacrylamide gel electrophoresis ay may mas mataas na resolution | SDS Page ay may mas magandang resolution. |
| Denaturation | |
| Kabilang sa gel electrophoresis ang parehong mga diskarte sa pag-denatur at hindi pag-denatur. | SDS Page ay nagde-denature ng mga protina bago ang paghihiwalay. |
Buod – Gel Electrophoresis vs SDS Page
Ang Gel electrophoresis ay isang karaniwang pamamaraan na ginagamit para sa paghihiwalay at pagsusuri ng DNA, RNA at mga protina batay sa kanilang laki at singil. Mayroong dalawang pangunahing uri ng gel electrophoresis katulad ng agarose gel electrophoresis at polyacrylamide gel electrophoresis. Ang mga agarose gel ay pangunahing ginagamit para sa paghihiwalay ng nucleic acid; kapag ang mas mataas na resolution ay kinakailangan, polyacrylamide gels ay ginagamit. Ang SDS Page ay isang uri ng gel electrophoresis na karaniwang ginagamit upang paghiwalayin ang mga kumplikadong pinaghalong protina. Ito ay itinuturing na isang high-resolution na pamamaraan ng paghihiwalay ng protina. Ito ang pagkakaiba sa pagitan ng gel electrophoresis at SDS Page.
