Mahalagang Pagkakaiba – YAC vs M13 Phage Vector
Ang DNA cloning ay isang mahalagang proseso na nagbibigay-daan sa pagpapalaganap ng mahahalagang fragment ng DNA ng mga organismo. Nangangailangan ito ng pagsasama ng partikular na DNA sa vector DNA upang lumikha ng recombinant na DNA na nagiging host organism. Ang vector ay isang molekula ng DNA na kumikilos bilang isang sasakyan upang dalhin ang mga dayuhang genetic na materyal sa isa pang cell o organismo. Ito ay dapat na may kakayahang mag-replicating sa loob ng host organism at makagawa ng maraming kopya ng recombinant DNA. Mayroong iba't ibang uri ng mga vector na ginagamit sa pag-clone ng DNA. Ang yeast artificial chromosome (YAC) at M13 phage vector ay dalawang uri sa kanila. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng YAC at M13 phage vector ay ang YAC ay isang artificial chromosome na umuulit sa yeast cells habang ang M13 phage vector ay isang solong stranded circular DNA ng bacteriophage M13 na nagrereplika sa mga E Coli cells.
Ano ang YAC Vector?
Ang YAC ay isang artipisyal na binuong chromosome na may kakayahang magdala ng malaking segment ng dayuhang DNA at mag-replika sa loob ng mga yeast cell. Mayroon itong centromere, telomere at autonomously replicating sequence na mahalaga para sa replikasyon at katatagan. Dapat ding taglayin ng YAC ang isang selective marker o mga marker at restriction site upang gawin itong isang epektibong cloning vector. Ang malalaking sequence mula 1000 kb hanggang 2000 kb ay maaaring ipasok sa YAC at ilipat sa yeast.
Figure 01: YAC Vector
Ano ang M13 Phage Vector?
Ang Bacteriophage M13 ay isang virus na nakahahawa at nagrereplika sa E Coli. Ang genome ng M13 bacteriophage ay maliit sa laki, mga 6.7 kb. Isa itong single-stranded, circular at positive sense DNA. Ang virus na ito ay partikular na nakakahawa ng E Coli bacteria sa pamamagitan ng F pilus. Kapag nakapasok na ito sa ssDNA sa bacterium, sini-synthesize nito ang complementary strand nito at nagiging dsDNA o ang replicative form (RF) ng M13. Ang RF ay maaaring kumilos tulad ng isang plasmid sa loob ng host organism. Ang dsDNA ay umuulit sa loob ng E Coli at gumagawa ng ssDNA na nagdadala ng mga bagong phage. Ang mga bagong phage na ito ay patuloy na inilalabas mula sa E Coli nang hindi pinapatay ang host cell. Gayunpaman, ang impeksyon ay nagpapabagal sa paglaki ng E Coli. Ang dsDNA ay maaaring makuha mula sa mga bacterial cell at magamit bilang mga vector sa DNA cloning. Ang mga ito ay kilala bilang M13 phage vectors. Madaling mamanipula ang mga ito at magamit nang katulad ng mga plasmid vectors.
Ang likas na kakayahan ng impeksyon ng mga M13 phage na ito ay nagsisilbing isang mahusay na kwalipikasyon upang magamit bilang isang vector sa pag-clone ng gene. Kapag ginagawang vector ang M13, maraming elemento ang dapat isama sa genome nito. Ang mga ito ay, isang gene para sa lac repressor (lac I) na protina, ang operator-proximal na rehiyon ng lac Z gene, isang lac promoter at isang multiple cloning site (polylinker). Kapag ang dsDNA ng M13 ay ginamit bilang mga vector, maaari itong ituring bilang isang plasmid vector. Gayunpaman, ang paggamit ng ssDNA M13 ay may mga pakinabang sa DNA sequencing at site-directed mutagenesis.
Dahil ang M13 phage vector ay mayroong maraming cloning site sa lacZ region, ang mga recombined vectors ay madaling matukoy sa pamamagitan ng blue/white colony screening sa agar plates na naglalaman ng IPTG at X-Gal. Ang mga asul na plake na ginawa sa mga plato ay hindi naglalaman ng mga pinagsama-samang phage. Samakatuwid, ang mga phage na may mga insert ay maaaring piliin para sa layunin ng pag-clone.
Figure 02: Bacteriophage M13
Ano ang pagkakaiba ng YAC at M13 Phage Vector?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| Ang YAC ay isang genetically engineered chromosome na may kakayahang magdala ng malaking segment ng dayuhang DNA at mag-replika sa loob ng yeast cell. | Ang M13 phage vector ay isang viral vector na binuo ng bacteriophage M13 na ginagamit para magpasok ng dayuhang DNA sa E Coli. |
| Layunin | |
| Ang YACs ay idinisenyo upang i-clone ang malalaking fragment ng genomic DNA sa yeast. | M13 phage vectors ang ginagamit para magpasok ng dayuhang DNA sa E Coli. |
| Insert Length | |
| Ang YAC ay maaaring maglaman ng megabase-sized na genomic insert (1000 kb – 2000 kb). | Ang laki ng mga insert ay humigit-kumulang 1, 500 bps. |
| Construction | |
| YAC DNA ay mahirap linisin nang buo at nangangailangan ng mataas na konsentrasyon para sa pagbuo ng YAC vector system. | Ito ay nangyayari sa pamamagitan ng cyclic photosynthetic electron chain. |
| Katatagan | |
| YAC ay hindi matatag. | M13 phage ay madaling makuha. |
| Laki | |
| Ang mga enzyme ay mas malalaking molekula. | M13 phage ay stable kaysa sa YAC. |
Buod – YAC vs M13 Phage Vector
Ang YAC ay isang artificially constructed vector system gamit ang isang partikular na rehiyon ng yeast chromosome para magpasok ng malalaking segment ng genetic material sa yeast cells. Ang M13 phage vector ay isang vector system na nagmula sa bacteriophage M 13 na gumagamit ng E coli bilang host organism. Ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng YAC at M13 Phage Vector. Parehong kapaki-pakinabang sa recombinant DNA technology at gene cloning.
