Mahalagang Pagkakaiba – Papel kumpara sa Manipis na Layer kumpara sa Column Chromatography
Ang Paper chromatography, thin layer chromatography, at column chromatography ay tatlong uri ng chromatographic technique. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng paper chromatography, thin layer chromatography at column chromatography ay batay sa uri ng stationary phase na ginamit sa chromatography technique. Gumagamit ang paper chromatography ng cellulose na papel bilang stationary phase nito, ang Thin Layer chromatography ay gumagamit ng alumina o silica gel bilang stationary phase nito, samantalang ang Column chromatography ay gumagamit ng column na naka-pack na may angkop na matrix material bilang stationary phase nito.
Sa proseso ng paghihiwalay at pagtukoy ng mga biomolecules gaya ng mga protina at carbohydrates, ang chromatography ay isang mahalagang biophysical technique na ginagamit. Ang Chromatography ay naghihiwalay ng mga compound batay sa kanilang solubility, laki at singil. Batay sa mekanismo ng paghihiwalay, ang chromatography ay gumagamit ng mga mekanismo tulad ng ion exchange, absorption, partition at size exclusion at mayroong tatlong chromatographic techniques; ibig sabihin, papel, manipis na layer, at column chromatography. Ang chromatography ng papel ay batay sa solid-liquid adsorption at solubility ng compound, at gumagamit ito ng cellulose na papel bilang nakatigil na yugto. Ang manipis na layer na chromatography ay batay sa solid-liquid adsorption ng mga molekula. Mayroon itong nakatigil na bahagi na karaniwang gawa sa alumina o silica gel at ang mobile phase na siyang solvent. Gumagamit ang column chromatography ng column na naka-pack na may matrix na ginagamit upang paghiwalayin ang mga molecule pangunahing batay sa kanilang laki, affinity o charge nito.
Ano ang Paper Chromatography?
Paper chromatography ay ang pinakasimpleng uri ng chromatography na ginamit, at hindi ito ginagamit para sa malawakang pananaliksik. Pangunahing ginagamit ito sa mga laboratoryo ng mag-aaral upang matukoy ang mga biomolecule tulad ng mga amino acid at carbohydrates na nasa mga mixture. Gumagamit ang paper chromatography ng isang nakatigil na bahagi na ginawa gamit ang cellulose na papel o Whatman na filter na papel at isang mobile phase na kadalasang inihahanda gamit ang mga organikong solvent gaya ng n-butanol, atbp. Ang nakatigil na bahagi ay puspos ng tubig, na ginagawang likido ang nakatigil na bahagi. Kaya, kapag ang mga compound ay nakita at pinapayagang tumakbo sa presensya ng mobile phase, depende sa solubility ng mga compound, sila ay pinaghihiwalay. Kaya, sa pagbuo ng chromatogram, ang paglamlam ay maaaring gawin upang matukoy ang haba ng bawat tambalan. Ang kadahilanan ng pagpapanatili ay maaaring kalkulahin.
Figure 01: Paper Chromatography
Paper chromatography ay maaaring higit pang uriin bilang ascending paper chromatography at descending paper chromatography depende sa direksyon ng tumatakbong solvent.
Ano ang Thin Layer Chromatography?
Ang Thin layer chromatography o TLC ay isang karaniwang ginagamit na pamamaraan para matukoy ang iba't ibang amino acid na nasa isang mixture o para sa pagtukoy ng mga protina. Ang pamamaraan ng paghihiwalay ay batay sa solid-liquid adsorption. Sa panahon ng thin layer chromatography, ang isang plato na gawa sa alumina o silica gel ay ginagamit bilang nakatigil na yugto. Ang pinaghalong solvent ay nag-iiba ayon sa kinakailangan at maaaring gumamit ng iba't ibang kumbinasyon ng mga organikong compound tulad ng n-butanol, acetic acid, at tubig upang ihanda ang solvent. Ang mga compound na ihihiwalay ay makikita sa plato at inilulubog sa solvent mixture. Kapag ang solvent ay naglalakbay pataas batay sa pagkilos ng capillary na ibinigay ng plato, ang mga compound na nakita sa plato ay gumagalaw din depende sa kanilang solubility sa solvent.
Figure 02: Manipis na Layer Chromatography
Ang pagtuklas ng mga batik pagkatapos ng chromatogram ay ginagawa sa pamamagitan ng iba't ibang pamamaraan ng paglamlam. Ang ilan ay gumagamit ng ninhydrin staining na medyo nakakalason na paraan ng paglamlam. Gumagamit ang mga modernong thin layer chromatogram ng mga fluorescence technique upang tingnan ang chromatogram pagkatapos ng run. Depende sa mga distansyang nalakbay nito, maaaring kalkulahin ang oras ng pagpapanatili ng bawat tambalan. Ito ay maaaring gamitin upang matukoy ang uri ng tambalang pinaghihiwalay batay sa pinaghalong ginamit. Pangunahing ginagamit ang TLC upang matukoy ang mga amino acid sa isang pinaghalong protina at gayundin upang paghiwalayin ang iba't ibang uri ng monosaccharides na nasa isang mixture.
Ano ang Column Chromatography?
Ang Column chromatography ay isang malawak na terminong ginamit upang ilarawan ang maraming uri ng mga diskarte sa chromatography na gumagamit ng column based na paraan ng paghihiwalay. Sa column chromatography, isang pisikal na column ang ginagamit na may packing material para paghiwalayin ang mga compound. Ang paghihiwalay ay maaaring batay sa iba't ibang pisikal na katangian na ipinakita ng mga compound. Ang mga katangiang ito ay maaaring ang charge, laki, 3D conformation at binding capacity, atbp. Kaya, ang column na naka-pack na may matrix material ay gumaganap bilang stationary phase at ang wash buffer na inilapat sa column ay gumaganap bilang mobile phase.
Kung ang mga molekula ay pinaghihiwalay batay sa laki, ang packing material ay nakaimpake sa paraang nag-iiwan ito ng mga pores para madaanan ng mga compound. Kaya, ang malalaking molekula na hindi maaaring dumaloy sa mga pores ay unang na-eluted, samantalang ang mas maliliit na molekula ay tumatagal ng mas mahabang oras upang ma-elute.
Figure 03: Column Chromatography
Kung ang mga molekula ay pinaghihiwalay batay sa kanilang singil, ang nakatigil na bahagi ay maglalaman ng alinman sa isang anion o cation exchanger kung saan ang mga compound ay maaakit batay sa kanilang singil. Kaya sa panahon ng paghuhugas ng hakbang, ang hindi nakatali na mga compound ay mapapawi. Sa pagdaragdag ng elution buffer, ang mga nakatali na sisingilin na compound ay mapapawi. Ang pagtuklas ng mga eluent na ito ay kadalasang nakabatay sa mga spectrophotometric na pamamaraan.
Ano ang Mga Pagkakatulad sa pagitan ng Papel na Manipis na Layer at Column Chromatography?
- Lahat ng Paper Thin Layer at Column Chromatography tatlong pamamaraan ang ginagamit para sa paghihiwalay ng mga biomolecule gaya ng mga amino acid, protina at carbohydrates.
- Paper Thin Layer at Column Chromatography techniques ay may mobile phase at stationary phase.
- Paper Thin Layer at Column Chromatography techniques ay gumagamit ng biophysical mechanism para sa paghihiwalay.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Paper thin Layer at Column Chromatography?
Papel vs Manipis na Layer vs Column Chromatography |
|
| Paper Chromatography | Ang Paper chromatography ay isang chromatographic technique na ginagamit upang paghiwalayin ang mga compound batay sa liquid-liquid adsorption at solubility ng compound. Gumagamit ito ng cellulose na papel bilang nakatigil na yugto nito. |
| Thin Layer Chromatography | Ang Thin layer chromatography ay isa pang chromatographic technique batay sa solid-liquid adsorption ng mga molecule. Mayroon itong nakatigil na bahagi na gawa sa alumina o silica gel at isang solvent bilang mobile phase, na siyang solvent. |
| Column Chromatography | Gumagamit ang column chromatography ng column na naka-pack na may matrix na ginagamit upang paghiwalayin ang mga molecule pangunahing batay sa laki, affinity o charge nito. |
| Stationary Phase | |
| Paper Chromatography | Ang papel na gawa sa nitrocellulose ng Whatman ay ginagamit bilang nakatigil na yugto sa paper chromatography. |
| Thin Layer Chromatography | Alumina o Silica gel ay ginagamit bilang nakatigil na yugto ng thin layer chromatography. |
| Column Chromatography | Ang isang column na naka-pack na may angkop na packing material ay ginagamit bilang stationary phase sa column chromatography. |
| Mobile Phase | |
| Paper Chromatography | Ang tumatakbong solvent ay ang mobile phase ng paper chromatography. |
| Thin Layer Chromatography | Ang tumatakbong solvent ay ang mobile phase ng thin layer chromatography. |
| Column Chromatography | Wash buffer ay ang mobile phase ng column chromatography. |
| Mga Mekanismong Ginamit para sa Paghihiwalay | |
| Paper Chromatography | Paper chromatography ay batay sa solid-liquid absorption. |
| Thin Layer Chromatography | Ang thin layer chromatography ay batay sa solid-liquid absorption. |
| Column Chromatography | Ang chromatography ng column ay nakabatay sa pagbubukod ng laki, singil at hugis. |
| Elution Buffer | |
| Paper Chromatography | Hindi kinakailangan ng paper chromatography. |
| Thin Layer Chromatography | Hindi kailangan para sa thin layer chromatography. |
| Column Chromatography | Kinakailangan sa column chromatography. |
| Detection | |
| Paper Chromatography | Paglamlam at sa pamamagitan ng pagtukoy sa Retention factor. |
| Thin Layer Chromatography | Paglamlam at sa pamamagitan ng pagtukoy sa Retention factor. |
| Column Chromatography | Pagpapasiya ng Spectrophotometric. |
Buod – Manipis na Layer ng Papel vs Column Chromatography
Ang Paper chromatography, TLC at column chromatography ay mga diskarte sa paghihiwalay na ginagamit upang paghiwalayin ang mga biomolecule gaya ng mga protina, amino acid at carbohydrates (pangunahin ang monosaccharides). Gumagamit ang paper chromatography ng cellulose na papel bilang nakatigil na yugto, at ang mekanismo ng paghihiwalay ay batay sa solid-liquid adsorption. Gumagamit din ang TLC ng mga mekanismo ng solid-liquid adsorption. Ang mga molekula ay pinaghihiwalay sa nakatigil na bahagi, depende sa kanilang solubility sa mobile phase. Gumagamit ang column chromatography ng mga pisikal na katangian tulad ng laki, hugis, singil at ang molekular na bigat ng tambalan upang maghiwalay. Ang column na naka-pack na may materyal na matrix ay gumaganap bilang ang nakatigil na yugto, samantalang ang wash buffer ay gumaganap bilang ang solvent phase. Ito ang pagkakaiba sa pagitan ng paper thin layer at column chromatography.
