Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng colorimetric at fluorometric assay ay ang colorimetric assay ay tumutukoy sa konsentrasyon ng mga may kulay na compound sa isang solusyon habang ang fluorometric assay ay tumutukoy sa kinetic mechanism ng isang solusyon.
Ang biochemical assay ay isang pamamaraan na nagde-detect o nagbibilang ng aktibidad ng isang biological molecule o substance nang analytical. Ito ay isang prosesong in vitro. Ang colorimetric assay at fluorometric assay ay dalawang uri ng karaniwang biochemical assay na isinasagawa sa mga laboratoryo. Ang maramihang mga diskarte tulad ng ELISA at western blotting ay mga kumplikadong biochemical assays din para sa quantification ng metabolic activity at pagsukat ng functional behavior ng biomolecules gaya ng mga protina, enzymes, at iba pang maliliit na molecule. Ang mga uri ng assay na ito ay ginagamit para sa pagtukoy ng mga pakikipag-ugnayan ng protina-DNA, protina-RNA, at protina-protein.
Ano ang Colorimetric Assay?
Ang colorimetric assay ay isang pamamaraan na tumutukoy sa konsentrasyon ng mga may kulay na compound sa isang solusyon. Sa madaling salita, ang colorimetric assay ay isang reaksyon na humahantong sa pagbabago ng kulay dahil sa isang enzymatic o kemikal na reaksyon sa pagitan ng mga reagents at analytes. Ang mga colorimetric assay ay isinasagawa sa biochemistry upang masuri ang mga enzyme, mga partikular na compound, hormone, antibodies at iba pang mga analyte. Gumagamit sila ng colorimeters o spectrophotometers. Ang mga colorimeter ay mga instrumento na nagpapakilala sa mga sample na may kulay upang makapagbigay ng layunin na sukatan ng mga katangian ng kulay. Ang spectrophotometer ay isang device na sumusukat sa intensity ng liwanag bilang isang function ng kulay o wavelength ng liwanag.
Figure 01: Colorimetric Assay
Paano Gumagana ang Colorimetric Assay?
Sa isang colorimetric assay, inihahanda ang isang plato na may partikular na antibody na nakatali sa mga balon. Pagkatapos ay idinagdag ang sample. Maaaring payagan nito ang sample na magbigkis sa antibody. Pagkatapos ay isang detection antibody at isang substrate ay idinagdag sa mga balon upang tumugon sa detection probe. Idinagdag ang stop solution sa dulo bago ang pagbabasa. Ang isang walang laman na balon na tinatawag na blangko ay naiwan na walang sample. Sa colorimetric assay, mas madidilim ang kulay, mas malaki ang konsentrasyon ng analyte. Karaniwan, isang wavelength lamang ang kailangan upang kunin ang pagbabasa. Ngunit kung mayroong reference measurement, dalawa o higit pang wavelength ang ginagamit.
Ano ang Fluorometric Assay?
Ang fluorometric assay ay isang pamamaraan na tumutukoy sa kinetic mechanism ng enzyme reactions. Ang isang fluorometric assay ay nagaganap sa pagbuo ng isang fluorescent na produkto mula sa isang nonfluorescent na substrate o vice versa. Gumagamit din ang assay na ito ng fluorescence resonance energy transfer (FRET) kung saan, binabago ng reaksyon ng enzymatic ang posisyon ng dalawang fluorophores sa substrate kaya, binabago ang intensity ng fluorescence.
Figure 02: Fluorometric Assay
Ang Fluorometric assay ay karaniwang mas sensitibo kaysa sa iba pang assay. Ang mga pagtatantya ng diagnostic enzyme sa tissue, cell, o fluid sample ng mga pasyente ay tumataas dahil sa mas mataas na sensitivity nito.
Paano Gumagana ang Fluorometric Assay?
Sa isang fluorometric assay, isang substrate ang idinagdag sa sample sa plate, at ang fluorescence response ay kinukuha gamit ang plate reader. Dito, hiwalay na sinusukat ang bawat cell. Ang mga opaque plate ay ginagamit sa fluorometric assays. Binabawasan nito ang pagkakalat ng liwanag. Dalawang wavelength ang kailangan para sa ganitong uri ng assay. Ang isang wavelength ay para makita ang excitement at ang isa pang wavelength ay para sa emission.
Ano ang Mga Pagkakatulad sa pagitan ng Colorimetric at Fluorometric Assay?
- Colorimetric assay at fluorometric assay ay dalawang uri ng biochemical assay.
- Ang parehong mga pagsusuri ay isinasagawa para sa mga medikal na diagnostic.
- Ang mga pagsusuring ito ay may kasamang enzymatic reaction.
- Ang parehong mga assay ay may kasamang substrate at analytes.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Colorimetric at Fluorometric Assay?
Ang colorimetric assay ay isang pamamaraan na tumutukoy sa konsentrasyon ng mga may kulay na compound sa isang solusyon, habang ang fluorometric assay ay isang pamamaraan na tumutukoy sa kinetic na mekanismo ng mga reaksyon ng enzyme. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng colorimetric at fluorometric assay. Bukod dito, ang fluorometric assays ay mas sensitibo kaysa sa colorimetric assays; kaya, ang mga fluorometric assay ay may kakayahang makakita ng higit pang mga analyte. Kaya, ito ay isa pang mahalagang pagkakaiba sa pagitan ng colorimetric at fluorometric assay. Higit pa rito, ang fluorometric assays ay nangangailangan ng dalawang wavelength, habang ang colorimetric assays ay isinasagawa sa isang wavelength.
Ang infographic sa ibaba ay nag-tabulate ng higit pang pagkakaiba sa pagitan ng colorimetric at fluorometric assay.
Buod – Colorimetric vs Fluorometric Assay
Ang biochemical assay ay isang analytical na proseso na ginagamit upang matukoy at mabilang ang mga cellular metabolic reaction. Ang colorimetric assay at fluorometric assay ay dalawang uri ng biochemical assay. Ang colorimetric assay ay isang reaksyon na humahantong sa pagbabago ng kulay dahil sa isang enzymatic o kemikal na reaksyon sa pagitan ng mga reagents at analyte habang ang fluorometric assay ay isang pamamaraan na ginagamit upang matukoy ang kinetic na mekanismo ng mga reaksyon ng enzyme. Ang parehong mga assay ay nakasalalay sa isang reaksyon ng enzymatic na nagsasangkot ng isang substrate at isang analyte. Ang mga fluorometric assay ay mas sensitibo kaysa sa mga colorimetric na assay. Ang pinakamahalaga, ang mga fluorometric assay ay nangangailangan ng dalawang wavelength, habang ang colorimetric assay ay maaaring isagawa nang may isang wavelength lamang. Kaya, ibinubuod nito ang pagkakaiba sa pagitan ng colorimetric at fluorometric assay.
