Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng micronucleus at comet assay ay ang micronucleus assay ay mahalaga upang suriin ang chromosomal damage bilang resulta ng mutagen exposure, habang ang comet assay ay mahalaga upang matukoy ang pangunahing pinsala sa DNA sa mga indibidwal na cell.
Genotoxicity assays ay nakakatulong upang masuri ang mga posibilidad ng mutations at chromosomal abnormalities. Kasama sa mga genotoxin ang mga kemikal na sangkap at radiation. Ang mga carcinogens, mutagens, at teratogens ay ang mga pangunahing kategorya ng genotoxin. Nagdudulot sila ng iba't ibang pinsala gaya ng mga point mutations, pagtanggal, single at double-strand break, chromosomal aberrations, micronuclei formations, DNA repair, at cell cycle interaction. Ang ganitong mga kondisyon ay maaaring humantong sa isang malawak na iba't ibang mga sakit, at ang genotoxicity assays ay pumipigil sa potensyal na pinsala mula sa mga kundisyong ito. Ang Micronucleus assay at comet assay ay dalawang pamamaraan sa ilalim ng genotoxicity assays.
Ano ang Micronucleus Assay?
Ang Micronucleus assay ay isang assay para masuri ang chromosomal damage bilang resulta ng pagkakalantad sa mutagen. Mahalaga ito sa pag-screen ng mga kemikal na nagdudulot ng pagbuo ng spindle at micronuclei. Ang micronucleus assay ay nagbibigay ng impormasyon sa katatagan ng mga kemikal kapag nakakasagabal sa chromosome structure at function. Maraming carcinogens ang nagpositibo sa pagsusuri sa micronucleus. Ang proseso ng assay ay nagsasangkot ng isang kemikal na paggamot at pagsukat sa dalas ng mga micronucleated na selula. Kung may abnormal na pagtaas sa bilang ng mga micronuclei cell, ipinapalagay nito na ang kemikal ay nagdudulot ng pinsala sa chromosomal.
Ang micronucleus assay ay karaniwang isinasagawa sa aktibong naghahati ng mga cell. Samakatuwid, ang mga erythrocytes at bone marrow stem cell na ginawa sa pamamagitan ng mga cell division ay mainam na mga kandidato para sa mga naturang assay. Nakakaranas sila ng pare-pareho at mabilis na turnover. Dahil walang totoong nuclei ang mga erythrocytes, ginagawa nitong mas nakikita ang mga micronucleated na cell sa dulo ng assay.
Figure 01: Micronucleus Assay Observation
Micronucleus assays ay matipid, mas mabilis, maginhawa, at nangangailangan ng mas kaunting kasanayan upang maisagawa. Ang mga ito ay nagpapakita ng mga chromosomal aberrations nang mabilis sa isang maaasahang paraan at lubhang kapaki-pakinabang upang mabilis na masuri ang mga chromosomal na pinsala. Ang isang espesyal at maraming nalalaman na uri ng micronucleus assay ay ang cytokinesis block micronucleus cytome (CBMNcyt) assay. Ito ang mas mainam na assay upang sukatin ang pinsala ng chromosomal at kawalang-tatag sa mga selula. Gayunpaman, ang pangunahing problema ng paggamit ng micronucleus assay ay hindi nito matukoy ang iba't ibang uri ng chromosomal aberrations, at ang assay ay may impluwensya sa mitotic rate at proporsyon ng cell death, na nagiging sanhi ng pagbabago ng mga resulta.
Ano ang Comet Assay?
Ang Comet assay, na kilala rin bilang single gel electrophoresis assay, ay isang simple at sensitibong pamamaraan upang matukoy ang pinsala sa DNA. Sinusukat nito ang mga break ng DNA sa mga eukaryotic cell at isang karaniwang pamamaraan para sa biomonitoring at genotoxicity testing.
Ang comet assay ay kasangkot sa encapsulation ng mga cell sa mababang melting point na mga agarose suspension, lysis ng mga cell sa neutral o alkaline na kondisyon, at electrophoresis ng mga nasuspinde na lysed na mga cell. Sa panahon ng proseso ng encapsulation, ang mga cell ay sinuspinde sa molten low melting point agarose, at ang agarose ay bumubuo ng isang matrix ng carbohydrate fibers upang maiangkla ang mga ito sa lugar. Ang agarose ay osmotically neutral; samakatuwid, ito ay nagbibigay-daan sa mga solusyon na tumagos sa pamamagitan ng gel at makakaapekto sa mga selula nang hindi nakakagambala at nagbabago sa kanila. Ang lysis solution ay isang highly concentrated aqueous s alt solution at isang detergent. Ang asin na ito ay nakakagambala sa mga protina at ang mga pattern ng pagbubuklod sa loob ng cell habang sinisira ang nilalaman ng RNA ng cell. Ang mga cell ay sumisira, at ang lahat ng mga protina, RNA, cytoplasmic at nucleoplasmic constituents, nakakagambala at nagkakalat sa agarose matrix, na iniiwan ang DNA.
Figure 02: Comet Assay
Ang electrophoresis solution ay isang alkaline solution kung saan ang DNA double helix ay nagde-denature, at ang nucleoid ay nagiging single-stranded. Sa prosesong ito, inilapat ang isang electric field upang pag-aralan ang mga imahe. Sinusukat ng pagsusuri ng imahe ang pangkalahatang intensity ng fluorescence para sa DNA at nucleoid at inihahambing ang dalawa. Ang kabuuang istraktura ay kahawig ng isang kometa na may pabilog na ulo na tumutugma sa natitirang hindi nasirang DNA at isang buntot para sa nasirang DNA. Kung mas maliwanag at mas mahaba ang buntot dahil sa mas malalakas na signal, mas mataas ang antas ng pinsala.
Ano ang Pagkakatulad sa pagitan ng Micronucleus at Comet Assay?
- Micronucleus at ang comet assay ay matipid, mas mabilis, maginhawa, at nangangailangan ng mas kaunting kasanayan.
- Ang mga ito ay pangunahing ginaganap sa DNA.
- Ang parehong assay ay nakakatulong sa pagtatasa ng mga mutasyon at chromosomal abnormalities.
- Bukod dito, ang parehong mga diskarte ay gumagamit ng mga kemikal upang isagawa ang pamamaraan.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Micronucleus at Comet Assay?
Ang micronucleus assay ay mahalaga sa pagsuri sa chromosomal damage bilang resulta ng mutagen exposure, habang ang comet assay ay mahalaga sa pag-detect ng pangunahing pinsala sa DNA sa mga indibidwal na cell. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng micronucleus at comet assay. Gayundin, ang micronucleus assay ay mahusay na itinatag upang makita ang clastogenicity at aneugenicity. Ang comet assay ay ginagamit bilang isang genotoxicity test upang makita ang pangunahing pinsala sa DNA sa mga cell. Bukod dito, ang isang micronucleus assay ay nagbibigay ng impormasyon sa katatagan ng mga kemikal, habang ang isang comet assay ay isang solong cell gel electrophoresis.
Ang infographic sa ibaba ay nagpapakita ng mga pagkakaiba sa pagitan ng micronucleus at comet assay sa tabular form para sa magkatabi na paghahambing.
Buod – Micronucleus vs Comet Assay
Genotoxicity assays ay nakakatulong upang masuri ang mga posibilidad ng mutations at chromosomal abnormalities. Ang Micronucleus assay at comet assay ay dalawang pamamaraan sa ilalim ng genotoxicity assays. Sinusuri ng Micronucleus assay ang pinsala sa chromosomal bilang resulta ng pagkakalantad ng mutagen. Ang Comet assay ay isang simple at sensitibong pamamaraan upang makita ang pinsala sa DNA. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng micronucleus at comet assay. Ang micronucleus assay ay mahalaga sa screening para sa mga kemikal na nagdudulot ng spindle formation at micronuclei. Ang pagsusuri ng kometa ay kasangkot sa encapsulation ng mga cell sa mababang melting point na mga agarose suspension, lysis ng mga cell sa neutral o alkaline na kondisyon, at electrophoresis ng mga nasuspinde na lysed na mga cell.
