PCR vs Real-time PCR
Ang PCR o Polymerase chain reaction ay isang revolutionized na pagtuklas sa modernong molecular biology, na unang binuo ng chemist na si Kary Mullis noong 1983. Pinapayagan nito ang isang solong sequence sa isang kumplikadong DNA na palakihin para sa pagsusuri. Ang pangunahing ideya ng PCR ay ang dalawang panimulang aklat, na pantulong sa magkasalungat na hibla ng pagkakasunud-sunod ng DNA, ay nakatuon sa isa't isa; ang mga panimulang aklat ay gumagawa ng mga pantulong na hibla, bawat isa ay naglalaman ng iba pang panimulang aklat. Samakatuwid, ang resulta ay isang malaking dami ng isang sequence na tumutugma sa DNA na nasa pagitan ng dalawang primer. Ang DNA polymerase enzyme ay ginagamit upang palawigin ang mga primer sa PCR. Ang DNA polymerase ay isang thermostable enzyme, at ito ay may kakayahang mabuhay sa mataas na temperatura (94 hanggang 95 °C) na ginagamit para sa denaturation ng template DNA.
Ang PCR ay nagsasangkot ng tatlong hakbang, ibig sabihin, paulit-ulit na pag-ikot ng denaturation, pagsusubo ng mga primer, at synthesis ng DNA. Ang isang thermocycler machine ay ginagamit upang maisagawa ang reaksyong ito upang ito ay ma-program upang baguhin ang mga temperatura nang mabilis at tumpak. Ang mga aplikasyon ng PCR ay mga pagsisiyasat sa krimen, fingerprint ng DNA, pagtuklas ng mga pathogen, at pagsusuri ng DNA ng mga unang uri ng tao.
Ano ang Conventional PCR?
May tatlong pangunahing yugto ng conventional PCR, ibig sabihin; Stage ng amplification ng DNA, paghihiwalay ng PCR, at pagtuklas ng mga produkto. Ang paghihiwalay ng mga segment ng DNA ay karaniwang ginagawa ng agarose gel electrophoresis. Ang mga produkto ay nabahiran ng etheiduim bromide. Sa wakas, ang pagtuklas ay nakakamit sa pamamagitan ng visualization ng mga banda papunta sa mga gel sa ilalim ng UV light. Samakatuwid, ang mga huling resulta ng maginoo na PCR ay hindi ipinahayag bilang mga numero. Karaniwan ang kumbensiyonal na PCR ay nakakatuklas lamang ng isang parameter.
Ano ang Real-time PCR?
Maaaring makita ng real-time na PCR ang amplification ng mga produkto, habang ang mga produkto ay synthesize. Sa pag-unlad ng teknolohiya, ang PCR ay naging isang napaka-tanyag na pamamaraan, lalo na para sa pagtuklas at pagkilala ng bakterya sa mga pagkain. Ang real-time na PCR ay gumagamit ng florescent dye system at thermocycler na nilagyan ng fluorescent-detection capability.
Ano ang pagkakaiba ng Conventional PCR at Real-time PCR?
• Mas tumatagal ang conventional PCR dahil gumagamit ito ng gel electrophoresis para pag-aralan ang amplified PCR products. Sa kabaligtaran, ang real-time na PCR ay hindi gaanong kumukuha ng oras dahil nakakakita ito ng mga amplification sa mga unang yugto ng reaksyon.
• Ang real-time na PCR ay nangongolekta ng data sa exponential growth phase ng PCR habang ang tradisyonal na PCR ay nangongolekta ng data sa End-point ng reaksyon.
• Maaaring hindi masyadong tumpak ang mga resulta ng end point ng conventional PCR, ngunit ang mga resulta ng real-time na PCR ay napakatumpak.
• Ang real-time na PCR ay mas sensitibo kaysa sa conventional PCR.
• Ang conventional PCR ay may napakahinang resolution habang ang real-time na PCR ay maaaring makakita ng napakakaunting pagbabago dahil sa mataas na resolution.
• Ang end point detection ng conventional PCR ay may maikling dynamic range habang ang real-time na PCR detection ay may malawak na dynamic range.
• Hindi tulad ng conventional PCR, ang mga automated detection technique ay makikita sa real-time na PCR.
• Ang conventional PCR ay sobrang sopistikado at labor intensive kaysa sa real-time na PCR.
• Hindi tulad ng real-time na PCR, hindi maaaring makita ng kumbensyonal na PCR ang mga patay at buhay na bakterya.
• Ang real-time na PCR ay gumagamit ng fluorescent dye system para makita ang mga produkto habang ang conventional PCR ay gumagamit ng ethidium bromide at UV light para makita ang mga banda sa agarose gel medium.
