Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng sucrose gradient at sucrose cushion ultracentrifugation ay na sa sucrose gradient ultracentrifugation, isang tuluy-tuloy na sucrose gradient ang ginagamit, habang sa sucrose cushion ultracentrifugation, isang discontinuous sucrose gradient ang ginagamit.
Sucrose gradient at sucrose cushion ultracentrifugation ay dalawang magkatulad na uri ng mga diskarteng ginagamit upang paghiwalayin ang mga partikular na uri ng macromolecules. Sa parehong mga diskarte, isang sucrose density gradient ang ginagamit. Ngunit sa ultracentrifugation ng sucrose gradient, ginagamit ang tuluy-tuloy na gradient ng density habang, sa ultracentrifugation ng sucrose cushion, ginagamit ang isang discontinuous density gradient.
Ano ang Sucrose Gradient Ultracentrifugation?
Ang Sucrose gradient ultracentrifugation ay isang pamamaraan na maaaring magamit upang i-fractionate ang mga macromolecule gaya ng DNA, RNA at mga protina. Mayroong ilang mga hakbang sa pamamaraang ito. Ang mga ito ay paghahanda ng sucrose gradient, centrifugation, separation at elution. Ang paghahanda ng gradient ay ang pangunahing hakbang sa pamamaraang ito. Sa diskarteng ito, ang sample na naglalaman ng iba't ibang laki ng macromolecules ay naka-layer sa ibabaw ng isang sucrose gradient column. Kapag centrifuging, iba't ibang laki ng macromolecules sediment sa pamamagitan ng sucrose gradient column sa iba't ibang mga rate. Ang sedimentation ay nakasalalay sa ilang mga kadahilanan, kabilang ang puwersa ng centrifugation, laki ng hugis at ang density ng macromolecules, density at lagkit ng gradient. Sa pagtatapos ng centrifugation, ang mga macromolecule ay spatially na pinaghihiwalay ng density. Mas malalaking macromolecules (high-density macromolecules) sediment patungo sa ibaba. Ang mga mas magaan (low-density macromolecules) ay nananatili sa tuktok ng gradient. Samakatuwid, ang mga molekula ay naghihiwalay bilang magkakaibang mga banda. Pagkatapos ay dapat paghiwalayin ang mga banda, at kailangang gawin ang paglilinis ng partikular na macromolecule mula sa sucrose.
Figure 01: Sucrose Gradient Ultracentrifugation
Sa panig ng aplikasyon, ang paraang ito ay malawakang ginagamit para sa fractionation ng mga molekula ng DNA. Ang sucrose gradient ultracentrifugation ay karaniwang ginagamit upang makilala ang kumplikadong laki at komposisyon ng protina. Bukod dito, ginagamit ang diskarteng ito para sa bahagyang pagdalisay ng mRNA.
Ano ang Sucrose Cushion Ultracentrifugation?
Ang Sucrose cushion ultracentrifugation ay isa pang pamamaraan na nagbibigay-daan sa fractionation ng macromolecules. Hindi tulad ng sucrose density gradient ultracentrifugation, ang sucrose cushion ultracentrifugation ay gumagamit ng discontinuous density gradient. Ang konsentrasyon ng sucrose ay tumataas mula sa itaas hanggang sa ibaba sa mga discrete na hakbang. Sa pamamaraang ito, ang paghihiwalay ay nakakamit sa pamamagitan ng paglalagay ng clarified extract sa ibabaw ng isang maliit na volume ng isang sucrose solution sa isang centrifuge tube, ang tinatawag na sucrose cushion. Pinapayagan nito ang mas mahusay na paghihiwalay sa high-speed centrifugation. Kapag ang mga molekula ay naghiwalay bilang isang banda sa pagitan ng sucrose cushion, ang puting banda ay maaaring kolektahin at linisin. Bukod dito, ang mga impurities ay maaaring higit pang alisin gamit ang sucrose cushion method. Ang paraan ng Sucrose cushion ay nagbibigay-daan sa 60-70% ng tubo na mapuno ng sample. Kaya naman, ang paraan ng sucrose cushion ay nagbibigay-daan sa mas malaking dami ng sample na maproseso.
Ano ang Pagkakatulad sa pagitan ng Sucrose Gradient at Sucrose Cushion Ultracentrifugation?
- Sucrose gradient at sucrose cushion ultracentrifugation ay dalawang pamamaraan na ginagamit upang paghiwalayin ang pinaghalong macromolecules.
- Sa parehong paraan, isang sucrose gradient ang ginagamit.
- Ang centrifugation ay isang hakbang sa parehong paraan.
- Ang mga molekula ay sediment bilang isang banda o sona sa bawat pamamaraan.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Sucrose Gradient at Sucrose Cushion Ultracentrifugation?
Sucrose gradient ultracentrifugation ay isang technique na gumagamit ng tuluy-tuloy na sucrose gradient sa centrifuge tube habang ang sucrose cushion ultracentrifugation ay isang technique na gumagamit ng discontinuous sucrose gradient. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng sucrose gradient at sucrose cushion ultracentrifugation.
Bukod dito, ang sucrose cushion ultracentrifugation ay nagbibigay-daan sa mas malaking volume ng sample na maproseso habang ang sucrose gradient ultracentrifugation ay nagbibigay-daan sa medyo mababang volume ng sample na maproseso.
Sa ibaba ng infographic ay nag-tabulate ng higit pang pagkakaiba sa pagitan ng sucrose gradient at sucrose cushion ultracentrifugation.
Buod – Sucrose Gradient vs Sucrose Cushion Ultracentrifugation
Sucrose gradient ultracentrifugation ay naghihiwalay sa mga macromolecule gamit ang tuluy-tuloy na sucrose gradient. Sa kabaligtaran, ang sucrose cushion ultracentrifugation ay gumagamit ng isang discontinuous sucrose gradient upang paghiwalayin ang partikular na uri ng mga particle sa isang halo. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng sucrose gradient at sucrose cushion ultracentrifugation. Ang paraan ng sucrose cushion ay nagbibigay-daan sa pagkolekta ng mga morphologically intact na particle dahil hindi ito nagdudulot ng mechanical stress, hindi tulad ng sucrose gradient ultracentrifugation, na dumudurog ng mga molecule sa ilalim ng tubo. Bukod dito, ang sucrose cushion ultracentrifugation ay nagbibigay-daan sa mas malaking dami ng sample na maproseso kaysa sa sucrose gradient ultracentrifugation.
