Mahalagang Pagkakaiba – Pahalang kumpara sa Vertical Gel Electrophoresis
Ang Gel electrophoresis ay isang pamamaraan sa laboratoryo na ginagamit sa genetics upang paghiwalayin ang mga mixture na naglalaman ng DNA, RNA, at iba pang mga protina ayon sa kani-kanilang singil at laki ng molekular. Ang DNA, RNA o mga protina na kailangang ihiwalay sa pamamaraang ito ay pinapatakbo sa pamamagitan ng isang gel na naglalaman ng maliliit na butas. Ang mga molekula ay hinihimok sa pamamagitan ng gel sa pamamagitan ng isang electric field. Ang mga molekula ay dumadaan sa mga pores ng gel, at ang bilis ng paggalaw ay inversely proportional sa kani-kanilang haba. Samakatuwid, ang mga molekula na may mas mababang sukat ng molekular ay mas mabilis na gumagalaw kaysa sa mga molekula na may mas mataas na timbang ng molekular. Ang electrical field ay nabuo sa pamamagitan ng pagkakaiba sa singil sa dalawang dulo ng gel. Ang isang dulo ay naglalaman ng positibong singil, at ang kabilang dulo ay naglalaman ng negatibong singil. Dahil ang mga molekula ng DNA at RNA ay negatibong sinisingil, sila ay maaakit patungo sa positibong sisingilin na dulo ng gel. Ang gel electrophoresis ay maaaring may dalawang magkaibang pamamaraan: horizontal gel electrophoresis at vertical gel electrophoresis. Sa pahalang na gel electrophoresis, ang gel ay nasa pahalang na oryentasyon at nakalubog sa isang tuluy-tuloy na tumatakbong buffer na nasa loob mismo ng gel box. Sa vertical gel electrophoresis, ang buffer system ay naka-orient nang patayo at hindi nagpapatuloy na may dalawang silid na naroroon sa itaas at sa ibaba na may isang katod at isang anode, ayon sa pagkakabanggit. Ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng horizontal at vertical gel electrophoresis.
Ano ang Horizontal Gel Electrophoresis?
Ang horizontal gel electrophoresis ay gumagamit ng pangunahing teorya para sa paghihiwalay ng mga molekula ng DNA, RNA o protina ayon sa kani-kanilang laki at singil ng molekula. Sa pamamaraang ito, ang gel ay naroroon sa isang pahalang na oryentasyon at nakalubog sa isang buffer na tuloy-tuloy. Ang agarose gel ay ginagamit upang paghiwalayin ang gel box sa dalawang compartments. Ang isang dulo ng gel box ay naglalaman ng anode habang ang kabilang dulo ay naglalaman ng isang katod. Kapag ang isang kasalukuyang ay inilapat, ang buffer na ginamit sa diskarteng ito ay nagbibigay-daan sa paglikha ng isang gradient ng pagsingil. Kapag ang singil ay inilapat, ang gel ay may posibilidad na uminit. Ang buffer ay gumagana din bilang isang coolant, na nagpapanatili ng temperatura sa pinakamabuting kalagayan na antas. Pinipigilan ng recirculation ng running buffer ang pagbuo ng pH gradient. Ang isang discontinuous buffer system ay hindi maaaring gamitin sa horizontal gel electrophoresis dahil ang dalawang compartment ng gel system ay konektado sa tumatakbong buffer. Ginagamit ang Acrylamide sa panahon ng gel electrophoresis upang paghiwalayin ang mga pinaghalong protina.
Figure 01: Horizontal Gel Electrophoresis
Sa horizontal gel electrophoresis, hindi maaaring gamitin ang acrylamide dahil ang gel box ay nalantad sa oxygen. Dahil sa pagkakaroon ng oxygen, ang polymerization ng acrylamide ay inhibited, at ito ay nakakasagabal sa pagbuo ng gel. Ang horizontal gel electrophoresis ay isang walang hirap na paraan na ginagamit sa paghihiwalay ng DNA at RNA.
Ano ang Vertical Gel Electrophoresis?
Vertical gel electrophoresis technique ay gumagana ayon sa pangunahing teorya ng gel electrophoresis, ngunit ito ay itinuturing na mas kumplikado kaysa horizontal gel electrophoresis method. Ang diskarteng ito ay gumagamit ng isang hindi tuloy-tuloy na buffer. Ang isang katod ay matatagpuan sa itaas na silid, at ang anode ay matatagpuan sa ilalim na silid. Ang mga electrodes na nasa bawat compartment ay nagbibigay ng kinakailangang electric field. Ang isang manipis na layer ng gel ay ibinubuhos sa pagitan ng dalawang naka-mount na mga plate na salamin. Samakatuwid, ang tuktok na bahagi ng gel ay nakalubog sa itaas na silid, at ang ilalim na bahagi ng gel ay nakalubog sa silid sa ibaba. Sa sandaling mailapat ang kasalukuyang, ang isang maliit na bahagi ng buffer ay gumagalaw sa ilalim na silid mula sa itaas na silid sa pamamagitan ng gel. Ang kasalukuyang inilapat sa diskarteng ito ay mga minutong yunit.
Figure 02: Vertical Gel Electrophoresis
Sa vertical gel electrophoresis, ang buffer ay dumadaloy lamang sa pamamagitan ng gel. Pinapayagan nito ang tumpak na kontrol ng gradient ng boltahe sa yugto ng paghihiwalay. Maaaring gamitin ang Acrylamide gel dahil ang mga compartment ay hindi nakalantad sa atmospheric oxygen. Dahil sa mas maliit na laki ng pore ng acrylamide gel, maaaring makamit ang tumpak na paghihiwalay na may mas mataas na resolution.
Ano ang Pagkakatulad sa pagitan ng Pahalang at Vertical Gel Electrophoresis?
- Ang parehong mga sistema ay gumagana ayon sa pangunahing teorya ng gel electrophoresis.
- Anode at cathode ang ginagamit para ibigay ang kinakailangang electric field sa parehong system.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Horizontal at Vertical Gel Electrophoresis?
Horizontal vs Vertical Gel Electrophoresis |
|
| Horizontal Gel Electrophoresis ay isang gel electrophoresis technique kung saan ang gel ay nasa pahalang na oryentasyon. | Vertical Gel Electrophoresis ay isang gel electrophoresis technique kung saan ang gel ay naka-orient nang patayo. |
| Buffer | |
| Ang pahalang na gel electrophoresis ay binubuo ng tuluy-tuloy na buffer. | Ang tumatakbong buffer ay hindi tuloy-tuloy sa vertical gel electrophoresis. |
| Paggamit ng Acrylamide | |
| Hindi maaaring gamitin ang acrylamide para sa horizontal gel electrophoresis dahil ang gel box ay nakalantad sa atmospheric oxygen. | Dahil hindi na-expose ang gel sa atmospheric oxygen dahil sa dalawang magkahiwalay na chamber, maaaring gamitin ang acrylamide para sa vertical gel electrophoresis. |
| Function | |
| Mas madalas na ginagamit ang horizontal gel electrophoresis para sa paghihiwalay ng mga pinaghalong DNA at RNA ngunit hindi sa mga protina. | Vertical gel electrophoresis ay ginagamit upang paghiwalayin ang mga pinaghalong protina. |
Buod – Horizontal vs Vertical Gel Electrophoresis
Ang Gel electrophoresis ay laboratory technique na malawakang ginagamit sa paghihiwalay ng mga mixture na naglalaman ng mga molecule ng DNA, RNA, at mga protina. Mayroong dalawang paraan ng gel electrophoresis: horizontal at vertical gel electrophoresis. Sa pahalang na gel electrophoresis, ang tumatakbong buffer ay tuloy-tuloy habang sa vertical gel electrophoresis, ito ay hindi tuloy-tuloy. Ito ang pagkakaiba sa pagitan ng pahalang at patayong gel electrophoresis. Ang parehong mga sistema ay gumagana ayon sa karaniwang prinsipyo ng gel electrophoresis.
I-download ang PDF Version ng Horizontal vs Vertical Gel Electrophoresis
Maaari mong i-download ang PDF na bersyon ng artikulong ito at gamitin ito para sa mga offline na layunin ayon sa tala ng pagsipi. Paki-download ang bersyon ng PDF dito Pagkakaiba sa pagitan ng Horizontal at Vertical Gel Electrophoresis.
