Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng radioactive at nonradioactive probes ay ang radioactive probes ay single-stranded DNA o RNA sequence na may label na radioactive isotopes habang ang nonradioactive probe ay single-stranded DNA o RNA sequence na may label na chemical tag o isang fluorescent na tag.
Nucleic acid hybridization ay isang mahalagang pamamaraan sa molecular biology, lalo na sa microbial diagnosis. Nakakatulong ito upang matukoy o matukoy ang isang partikular na pagkakasunud-sunod ng nucleic acid. Sa pamamaraang ito, ang mga nucleic acid ay naayos sa isang solidong ibabaw at na-hybrid sa isang probe. Ang probe ay isang fragment ng DNA o RNA na pantulong sa isang sequence ng interes. Kung ang target na sequence ay naroroon sa sample, ang probe ay magha-hybrid dito at gagawin itong detectable. Mayroong dalawang uri ng probes bilang radioactive at nonradioactive probes. Samakatuwid, maaari naming i-tag ang mga probe ng isang radioactive tag o isang fluorescent na tag.
Ano ang Radioactive Probes?
Ang
Radioactive probes ay ang mga single-stranded na DNA o RNA fragment na may radioactive tag. Ginagamit ang mga radioisotop sa paghahanda ng mga radioactive probes. Ang mga radioisotop na 32P, 33P at 35S ay karaniwang ginagamit sa pag-label ng mga probe. Bukod dito, ang mga radioisotop na 3H at 1251 ay ginagamit din sa mas mababang antas sa pag-label ng mga probe. Ngunit ginagamit ang mga ito para sa mga partikular na aplikasyon. Sa iba't ibang radioisotopes, ang 32P ay ang pinakakaraniwang ginagamit na isotope sa pag-label ng radioactive probes.
Ang Radioactive probe ay nagbibigay ng mas mataas na antas ng pagiging maaasahan at pagtitiyak. Samakatuwid, nagbibigay sila ng maximum na sensitivity at nagbibigay-daan sa tumpak na dami ng mga target na pagkakasunud-sunod. Gayunpaman, mayroong ilang mga disadvantages na nauugnay sa radioactive probes. Mayroon silang maikling kalahating buhay. Bukod dito, ang mga ito ay mapanganib at ang produksyon, paggamit at pagtatapon ay may problema kapag humahawak. Bilang karagdagan, ang paghahanda ng radioactive probe ay isang magastos na proseso. Samakatuwid, dahil sa mga isyu sa kaligtasan at gastos, ang mga radioactive probe ay hindi ginagamit bilang nonradioactive probe sa ngayon.
Ano ang Nonradioactive Probes?
Ang Nonradioactive probe ay ang pangalawang uri ng probe na may label na kemikal. Ang Digoxigenin ay isang nonradioactive probe, na isang antibody-based na marker. Ang mga digoxigenin probes ay tiyak at sensitibo. Ang biotin ay isa pang label na ginagamit sa paghahanda ng nonradioactive probe. Ang Biotin/Streptavidin at Digoxigenin/Antibody-detection system ay ang pinakakaraniwang ginagamit na nonradioactive probe sa hybridization. Higit pa rito, ang malunggay na peroxidase system ay isa pang nonradioactive probe system. Kapag ang mga nonradioactive probe na ito ay na-hybrid sa mga target na pagkakasunud-sunod, maaari silang makita sa pamamagitan ng autoradiography o iba pang mga diskarte sa imaging.
Figure 01: Hybridization na may Nonradioactive Probes
Nonradioactive probe ay mas madalas na ginagamit sa nucleic acid hybridization kaysa radioactive probe. Ito ay dahil ang mga nonradioactive probe ay hindi nauugnay sa mga mapanganib na materyales. Higit pa rito, ang mga nonradioactive detection na pamamaraan ay nangangailangan ng mas maikling oras ng pagkakalantad upang makita ang hybridization signal. Gayunpaman, ang mga hakbang na kasangkot sa hybridization ng DNA na may nonradioactive probes ay kadalasang nakakapagod at nakakaubos ng oras. Bukod dito, mahal ang mga solusyon na available sa komersyo.
Ano ang Mga Pagkakatulad sa pagitan ng Radioactive at Nonradioactive Probes?
- Ang radioactive at nonradioactive probes ay dalawang uri ng probes na ginagamit sa nucleic acid hybridization.
- Pinapadali nila ang pagtuklas ng mga target na sequence sa sample.
- Ang parehong uri ng probe ay pare-parehong sensitibo at partikular.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Radioactive at Nonradioactive Probes?
Ang Radioactive probes ay ang single-stranded DNA o RNA sequence na may label na radioactive isotopes, habang ang nonradioactive probes ay ang single-stranded DNA o RNA sequence na may label na chemical tag. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng radioactive at nonradioactive probes. Gayundin, ang mga radioactive isotopes ay mapanganib. Samakatuwid, ang mga radioactive probe ay lubhang mapanganib, habang ang mga nonradioactive probe ay hindi mapanganib.
Bukod dito, ang isa pang pagkakaiba sa pagitan ng radioactive at nonradioactive probes ay ang kanilang mga disadvantage. Ang maikling kalahating buhay at ang mga panganib na nauugnay sa kanilang produksyon, paggamit at pagtatapon ay ang mga disadvantage ng paggamit ng radioactive probes. Sa kabilang banda, ang mga hakbang na kasangkot sa hybridization ng DNA na may mga nonradioactive probes ay kadalasang nakakapagod at nakakaubos ng oras.
Sa ibaba ng infographic ay nagpapakita ng higit pang mga paghahambing na nauugnay sa pagkakaiba sa pagitan ng radioactive at nonradioactive probe.
Buod – Radioactive vs Nonradioactive Probes
Ang Ang probe ay isang fragment ng DNA o RNA na naglalaman ng nucleotide sequence na pantulong sa sequence ng interes. Upang makita ang target na pagkakasunud-sunod, ang mga probes ay maaaring may label na radioactively, fluorescently o chemically. Ang mga probes ay nagbubuklod sa mga pantulong na pagkakasunud-sunod sa sample. Ang mga radioactive probes ay may label na radioactive isotopes habang ang nonradioactive probes ay may label na biotin, digoxigenin o horseradish peroxidase. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng radioactive at nonradioactive probe.
