Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng yeast one hybrid at yeast two hybrid ay ang yeast one hybrid ay in vitro based assay para suriin ang DNA-protein interaction habang ang yeast two hybrid ay in vitro based assay para suriin ang protein-protein interaction.
Makakatulong ang pag-aaral sa mga pakikipag-ugnayan sa pagitan ng mga cellular molecule upang tukuyin ang mga site ng pagkilala na kasangkot sa pagpapahayag ng gene at mga daanan ng protina. Ang mga pakikipag-ugnayan ng DNA at protina ay mahalaga sa mga proseso ng cellular tulad ng mga pagbabago sa DNA at regulasyon ng transkripsyon, atbp. Sa kabilang banda, ang mga pakikipag-ugnayan ng protina at protina ay gumaganap ng mahahalagang papel sa mga proseso ng cellular tulad ng replikasyon, transkripsyon, pagsasalin, at transduction ng signal. Samakatuwid, napakahalagang kilalanin ang mga pakikipag-ugnayan na ito ng mga molekula ng cellular sa pamamagitan ng iba't ibang mga assay. Ang yeast one hybrid at yeast two hybrid ay dalawang in vitro based assays para suriin ang DNA-protein at protein-protein interaction.
Ano ang Yeast One Hybrid?
Ang Yeast one hybrid (Y1H) ay isang in vitro based assay para suriin ang intracellular DNA-protein interaction. Ang pamamaraang ito ay unang itinatag nina Wang at Reed noong 1993. Mula noon, nagpakita ito ng mas malaking kapangyarihan sa biological research. Sa assay na ito, mayroong dalawang pangunahing bahagi: DNA bait at protein preys.
Figure 01: Yeast One Hybrid
Sa pamamaraan, ang isang DNA sequence (DNA bait) ay unang na-clone upstream ng dalawang magkaibang reporter (HIS3, LacZ). Ang mga konstruksyon ng reporter na ito ay isinama sa genome ng isang yeast strain. Ang mga salik ng transkripsyon ay kinuha bilang mga biktima ng protina. Ang mga kadahilanan ng transkripsyon ay pinagsama sa transcriptional activation domain (AD) ng yeast Gal4 transcriptional factor upang makagawa ng mga hybrid na protina. Ang buong hybrid na protina na ito ay isinama sa isang plasmid bago ito ipasok sa yeast strain. Matapos ang pagpapakilala ng recombinant plasmid, kapag ang transcriptional factor ay nakikipag-ugnayan sa DNA fragment, ang AD moiety ay nagpapagana ng reporter gene expression (HIS3or LacZ). Ang pagkakasunud-sunod ng mga plasmid ay nagbibigay-daan sa pagkilala sa transcriptional factor na maaaring magbigkis sa fragment ng DNA. Kamakailan lamang, ginamit ang yeast one hybrid na paraan upang magsaliksik ng diagnosis ng sakit. Samakatuwid, sa hinaharap, mas malawak na gagamitin ang assay na ito sa siyentipikong pananaliksik at mga medikal na paggamot.
Ano ang Yeast Two Hybrid?
Ang Yeast two hybrid (Y2H) ay isang in vitro based assay upang suriin ang intracellular protein at mga interaksyon ng protina. Ang paraang ito ay orihinal na natagpuan ni Stanley Fields at Ok-Kyu Song noong 1989. Nakikita ng diskarteng ito ang mga interaksyon ng protina-protina gamit ang Gal4 transcription factor ng yeast.
Figure 02: Yeast Two Hybrid
Sa pamamaraang ito, dalawang fusion (hybrids) ang unang binuo gamit ang mga protina na interesante: pagsasama ng isang protina sa DNA binding domain (DBD) at sa pamamagitan ng pagsasama ng iba pang protina sa activator domain (AD) ng Gal4 transcription factor. Ang protina na pinagsama sa DBD ay kilala bilang pain habang, ang protina na pinagsama sa AD ay kilala bilang biktima. Sa yeast strain, sa interaksyon ng pain at biktima, ang DBD at AD ay dinadala malapit upang makabuo ng functional Gal4 transcription factor upstream ng reporter gene. Ang functional transcription factor ay nagpapagana ng pagpapahayag ng gene ng reporter. Higit pa rito, ang paraang ito ay kasalukuyang ginagamit upang i-screen ang mga interaksyon ng integral membrane proteins sa mammalian cells.
Ano ang Pagkakatulad sa pagitan ng Yeast One Hybrid at Yeast Two Hybrid?
- Yeast one hybrid at yeast two hybrid ay dalawang in vitro based assays para suriin ang DNA-protein at protein-protein interaction.
- Ang mga pagsusuring ito ay gumagamit ng yeast strains.
- Gumagamit ang parehong assay ng activation domain (AD) ng Gal4 transcription factor.
- Gumagamit sila ng expression ng reporter gene (HIS3, o LacZ) para makita ang mga pakikipag-ugnayan.
- Mayroon silang pain at biktima.
- Ang parehong mga assay ay lubos na kapaki-pakinabang sa modernong biological research.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Yeast One Hybrid at Yeast Two Hybrid?
Ang Yeast one hybrid ay isang in vitro based assay para suriin ang DNA at protein interaction habang ang yeast two hybrid ay in vitro based assay para suriin ang protein at protein interaction. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng yeast one hybrid at yeast two hybrid. Higit pa rito, sa yeast one hybrid, ang pain ay isang fragment ng DNA, at ang biktima ay isang molekula ng protina. Sa kabilang banda, sa yeast two hybrid, parehong mga molecule ng protina ang pain at biktima.
Inililista ng infographic sa ibaba ang mga pagkakaiba sa pagitan ng yeast one hybrid at yeast two hybrid sa tabular form para sa magkatabi na paghahambing.
Buod – Yeast One Hybrid vs Yeast Two Hybrid
Yeast one hybrid at yeast two hybrid ay dalawang mahalagang in vitro based assays. Ang yeast one hybrid ay isang in vitro based assay para suriin ang DNA at protein interaction habang ang yeast two hybrid ay in vitro based assay para suriin ang protein at protein interaction. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng yeast one hybrid at yeast two hybrid.
