Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng Coomassie at silver staining ay ang coomassie staining ay isang protein staining technique na gumagamit ng coomassie brilliant blue stain, habang ang sliver staining ay isang protein staining technique na gumagamit ng silver stain.
Ang paghihiwalay at pagkakakilanlan ng protina ay mga kritikal na hakbang sa pagsusuri ng proteome. Kailangan nila ng high-resolution na pagkilala sa protina pagkatapos ng gel electrophoresis. Maraming pamamaraan ng paglamlam na kinabibilangan ng iba't ibang mantsa gaya ng anionic dyes (coomassie brilliant blue), metal cations (imidazole-zinc), silver stain at fluorescent dyes, atbp. Minsan, maaari ding gumamit ng radioactive probes. Ang pagpili ng pamamaraan ng paglamlam ay depende sa pagiging simple, pagkakaroon ng mga kagamitan sa imaging sa laboratoryo, atbp.
Ano ang Coomassie Staining?
Ang Coomassie staining ay isang protein staining technique na gumagamit ng coomassie brilliant blue stain. Ito ay karaniwang tinatawag na coomassie blue technique. Ang Coomassie brilliant blue ay ang pinakasikat na anionic protein-dye. Karaniwang nabahiran ng mantsa na ito ang halos lahat ng mga protina na may magandang quantitative linearity sa medium sensitivity. Ang Coomassie brilliant blue stain ay hindi partikular na nagbubuklod sa halos lahat ng protina. Mayroong dalawang magkaibang variant ng coomassie brilliant blue stain: R-250 at G-250. Nag-aalok ang R-250 ng mas maikling oras ng paglamlam, habang ang G-250 ay available sa mas sensitibo at environment friendly na mga formulation.
Figure 01: Coomassie Staining
Ang Coomassie dyes ay napakasikat sa mass spectrometry studies at protein identification studies. Bukod dito, ang bio-safe coomassie stain ay isang hindi mapanganib na formulation ng coomassie blue G-250 na kasalukuyang magagamit sa merkado. Ang bentahe ng pormulasyon na ito ay nangangailangan lamang ng tubig para sa pagbabanlaw at pag-destain. Nag-aalok ang bio-safe coomassie stain ng sensitivity na katumbas ng conventional coomassie blue G-250 ngunit mas mahusay kaysa sa coomassie stain R-250. Higit pa rito, mayroon itong mas simple at mas mabilis na staining protocol kaysa sa conventional Coomassie blue G-250. Ang disbentaha ng coomassie blue staining ay hindi gaanong sensitibo kumpara sa silver staining. Ang paglamlam ng asul na Coomassie ay humigit-kumulang 50 beses na hindi gaanong sensitibo kaysa sa paglamlam ng pilak. Gayunpaman, dahil sa pagiging simple nito sa pagbubuklod, mas gusto ito sa maraming pag-aaral.
Ano ang Silver Staining?
Ang Silver staining ay isang pamamaraan ng paglamlam ng protina na gumagamit ng silver stain. Ang paglamlam ng pilak ay ginagamit upang mantsang parehong agarose at polyacrylamide gels. Ang silver staining ng protina sa agarose gels ay unang binuo noong 1973 nina Kerenyi at Gallyas. Nang maglaon, inangkop ito para sa mga protina sa polyacrylamide gel na ginagamit sa SDS-PAGE. Sa kasalukuyan, ang paglamlam ng pilak ay ginagamit din para sa paglamlam ng DNA o RNA. Upang mantsang ang mga gel, ang mga gel ay incubated na may silver nitrate solution sa pamamaraang ito. Nabahiran ng silver staining ang mga site kung saan naroroon ang mga protina mula kayumanggi hanggang itim.
Figure 02: Silver Staining
Ang intensity ng silver staining ay depende sa pangunahing istraktura ng protina. Bukod dito, ang kalinisan ng mga sisidlan na ginamit at ang kadalisayan ng mga reagents ay maaari ring makaimpluwensya sa kalidad ng paglamlam ng pilak. Gayunpaman, ang disbentaha ng silver staining ay hindi nito matukoy ang lahat ng mga protina, lalo na ang mga glycoprotein at mga protina na may malalaking binagong grupo na nakakabit sa kanilang mga side chain.
Ano ang Pagkakatulad sa pagitan ng Coomassie at Silver Staining?
- Coomassie at silver staining ay dalawang pamamaraan na ginagamit sa paglamlam ng protina.
- Maaari nilang mantsang parehong protina at DNA.
- Ang parehong mga diskarte sa paglamlam ay may mga disbentaha.
- May mga katulad na hakbang ang mga diskarteng ito, gaya ng pag-aayos, paglamlam at pag-destain.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Coomassie at Silver Staining?
Ang Coomassie staining ay isang protein staining technique na gumagamit ng coomassie brilliant blue stain, habang ang sliver staining ay isang protein staining technique na gumagamit ng silver stain. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng Coomassie at paglamlam ng pilak. Higit pa rito, ang Coomassie staining ay hindi gaanong sensitibo kaysa sa silver staining.
Inililista ng infographic sa ibaba ang mga pagkakaiba sa pagitan ng Coomassie at silver staining sa tabular form para sa magkatabi na paghahambing.
Buod – Coomassie vs Silver Staining
Upang makita ang mga protina, maaaring magsagawa ng isang dye-binding na partikular sa protina o gumagawa ng kulay na kemikal na reaksyon. Ito ay tinatawag na paglamlam ng protina. Ang Coomassie at silver staining ay dalawang pamamaraan na ginagamit sa paglamlam ng protina. Ang pamamaraan ng pag-stain ng Coomassie ay gumagamit ng coomassie brilliant blue stain habang ang sliver staining ay gumagamit ng silver stain. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng Coomassie at silver staining.
