Mahalagang Pagkakaiba – Pangunahin kumpara sa Pangalawang Cell Culture
Bago talakayin ang pagkakaiba sa pagitan ng Primary at Secondary Cell Culture, bigyan muna natin ng maikling tukuyin kung ano ang cell culture. Ang cell culture ay ang proseso ng pag-alis ng mga cell mula sa isang hayop o halaman at kasunod na paglaki sa isang artipisyal na kinokontrol na kapaligiran. Ang mga cell ay maaaring direktang alisin mula sa tissue at paghiwa-hiwalayin sa pamamagitan ng enzymatic o mekanikal na pamamaraan o maaaring makuha mula sa isang kultura na naitatag na. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng pangunahin at pangalawang kultura ng cell ay ang mga cell para sa pangunahing kultura ng cell ay nakuha nang direkta mula sa isang tissue ng hayop o halaman, habang ang mga cell para sa pangalawang kultura ng cell ay nakuha mula sa isang naitatag na pangunahing kultura. Samakatuwid, ang pangalawang kultura ay isang bagong kulturang nagmula sa pangunahing kultura.
Ating tingnan pa ang kahulugan ng pangunahin at pangalawang kultura ng cell upang mas maiba-iba ang mga ito.
Ano ang Primary Cell Culture?
Ang Primary cell culture ay ang paghihiwalay ng mga cell mula sa isang magulang na hayop o tissue ng halaman sa pamamagitan ng enzymatic o mekanikal na mga hakbang at pagpapanatili ng paglaki ng mga cell sa isang angkop na substrate sa mga lalagyan ng salamin o plastik sa ilalim ng kontroladong mga kondisyon sa kapaligiran. Ang mga cell sa pangunahing kultura ay may parehong karyotype (bilang at hitsura ng mga chromosome sa nucleus ng isang eukaryotic cell) tulad ng mga cell na iyon sa orihinal na tissue. Maaaring uriin sa dalawa ang pangunahing kultura ng cell batay sa uri ng mga cell na ginagamit sa kultura.
Anchorage Dependent o Adherent Cell – Ang mga cell na ito ay nangangailangan ng attachment para sa paglaki. Ang mga nakadikit na cell ay kadalasang nakukuha mula sa mga tissue ng mga organo, halimbawa mula sa kidney kung saan ang mga cell ay hindi kumikibo at naka-embed sa connective tissue
Anchorage Independent o Suspension Cells – Ang mga cell na ito ay hindi nangangailangan ng attachment para sa paglaki. Sa madaling salita, ang mga cell na ito ay hindi nakakabit sa ibabaw ng daluyan ng kultura. Ang lahat ng mga kultura ng suspensyon ay nagmula sa mga selula ng sistema ng dugo; halimbawa, ang white blood cell lymphocyte ay sinuspinde sa plasma
Ang mga cell na nagmula sa mga pangunahing kultura ay may limitadong tagal ng buhay. Ang mga cell ay hindi maaaring hawakan nang walang katiyakan dahil sa ilang mga kadahilanan. Ang pagtaas ng mga bilang ng cell sa pangunahing kultura ay hahantong sa pagkaubos ng substrate at nutrients. Gayundin, unti-unting tataas ng aktibidad ng cellular ang antas ng mga nakakalason na metabolite sa kulturang pumipigil sa karagdagang paglaki ng cell.
Sa yugtong ito, kailangang magsagawa ng pangalawa o subculture para matiyak ang tuluy-tuloy na paglaki ng cell.
Ano ang Secondary Cell Culture?
Tulad ng inilarawan sa itaas, kapag ang mga cell sa adherent culture ay sumasakop sa lahat ng magagamit na substrate o kapag ang mga cell sa suspension culture ay lumampas sa kapasidad ng medium na suportahan ang karagdagang paglaki, ang cell proliferation ay magsisimulang mabawasan o ganap na huminto. Upang mapanatili ang pinakamainam na density ng cell para sa patuloy na paglaki at upang pasiglahin ang karagdagang paglaganap, ang pangunahing kultura ay kailangang subcultured. Ang prosesong ito ay kilala bilang pangalawang cell culture.
Sa panahon ng pangalawang kultura ng cell, ang mga cell mula sa pangunahing kultura ay inililipat sa isang bagong sisidlan na may sariwang medium ng paglaki. Ang proseso ay nagsasangkot ng pag-alis ng nakaraang growth media at pag-disassociating ng mga nakadikit na cell sa mga sumusunod na pangunahing kultura. Ang pangalawang pag-culture ng cell ay pana-panahong kinakailangan upang mabigyan ang mga cell ng lumalagong espasyo at mga sariwang sustansya, sa gayon, pinahaba ang buhay ng mga cell at pagpapalawak ng ilang mga cell sa kultura.
Ang pangalawang pag-kultura ng isang tiyak na dami ng isang pangunahing kultura sa isang pantay na dami ng sariwang medium ng paglaki ay nagbibigay-daan sa pangmatagalang pagpapanatili ng mga linya ng cell. Ang pangalawang pag-kultura sa mas malaking volume ng sariwang medium ng paglaki ay ginagawa upang madagdagan ang bilang ng mga cell, halimbawa sa mga prosesong pang-industriya o siyentipikong eksperimento.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Primary Cell Culture at Secondary Cell Culture?
Dahil naunawaan na natin ang dalawang termino nang magkahiwalay, ihahambing natin ang dalawa upang makahanap ng iba pang pagkakaiba sa pagitan nila.
Kailan Gagamitin ang Pangunahin at/o Secondary Cell Culture
Depende ito sa kung ano ang gusto mong matutunan at kung anong uri ng eksperimento ang gagawin mo.
Primary Cell Culture: Ito ang prosesong gagamitin sa kultura ng mga cell mula sa parental tissue na may kinalaman. Ang mga cell sa pangunahing kultura ay magkakaroon ng isang may hangganang habang-buhay dahil sa pagkaubos ng substrate at nutrients at pagbuo ng mga lason, na may paglaki ng populasyon. Ang pangunahing kultura, sa kabila ng mga diskarte sa paghihiwalay na ginagamit sa proseso ng paghihiwalay, ay maaaring maglaman ng ilang uri ng mga cell. Gayunpaman, maaaring hindi ito problema sa lahat ng uri ng mga eksperimento at sa mga ganitong pagkakataon ay maaaring gamitin lamang ang pangunahing kultura.
Secondary Cell Culture: Karaniwan, ang bilang ng mga cell na nakuha mula sa pangunahing kultura ay hindi sapat sa mga eksperimento. Ang pangalawang kultura ng cell ay nagbibigay ng pagkakataon para sa pagpapalawak ng populasyon ng cell at gayundin, pagpapahaba ng tagal ng buhay. Ito ay nagbibigay-daan sa karagdagang pagpili ng mga cell sa paggamit ng isang pumipili na daluyan at nagbibigay-daan sa genotypic at phenotypic na pagkakapareho sa populasyon. Ginagamit ang prosesong ito upang makabuo ng mga replicate na kultura para sa pangunahing katangian, pangangalaga, at pag-eeksperimento.
Pagkatulad sa Tissue ng Magulang
Primary Cell Culture: Ang mga cell para sa primary cell culture ay direktang nakukuha mula sa tissue ng hayop o halaman. Samakatuwid, ang mga cell sa pangunahing kultura ay malapit na kahawig ng tissue ng magulang nito at naaayon, ang biological na tugon ay maaaring mas malapit sa isang in vivo na sitwasyon kaysa sa pangalawang cell culture.
Secondary Cell Culture: Ang pangalawang cell culture ay nagmula sa pangunahing cell culture. Bagama't ang sub-culturing ay nagpapahaba ng habang-buhay ng mga cell, may posibilidad na pagkatapos ng ilang yugto, ang mga cell ay maaaring mabago o maaaring mawalan ng kontrol sa hindi paghahati ng higit sa isang tiyak na dami ng beses. Ito ay maaaring dahil sa mga mutasyon o genetic na pagbabago sa mga pangunahing selula sa panahon ng sub-culturing. Halimbawa, ang ilang microorganism ay may posibilidad na umangkop sa mga kondisyon ng kultura, na kadalasang iba sa kanilang natural na kapaligiran, sa pamamagitan ng pagbabago ng kanilang biology.
Proseso ng Kultura – Pagkuha ng mga Cell
Primary Cell Culture: Sa pangunahing cell culture, ang tissue ng hayop o halaman ay dadaan sa mga yugto ng pagbabanlaw, dissection, at mechanical o enzymatic disaggregation. Maglalaman ang disaggregated tissue ng iba't ibang uri ng cell, at maaaring mangailangan ito ng paggamit ng separation technique upang maihiwalay ang mga cell na interesado.
Secondary Cell Culture: Sa pangalawang cell culture, kung ang pangunahing kultura ay isang adherent culture, ang unang hakbang ay alisin ang mga cell mula sa attachment (surface of culture vessel) sa pamamagitan ng mekanikal o enzymatic na paraan. Pagkatapos, ang mga cell ay kailangang ihiwalay sa isa't isa upang bumuo ng isang solong cell suspension.
Bilang ng mga Cell sa Kultura
Primary Cell Culture: Hindi kanais-nais na magkaroon ng absolute single cell suspension, dahil maraming pangunahing cell ang mas nabubuhay sa maliliit na cluster.
Secondary Cell Culture: Ito ay sapat na upang bumuo ng isang solong cell suspension.
Buhay ng Kultura
Primary Cell Culture: Ang mga pangunahing cell culture ay may may hangganang haba ng buhay. Tulad ng ipinaliwanag sa itaas, ito ay dahil ang paglaki ng mga selula ay umuubos ng substrate at nutrients at humahantong sa akumulasyon ng mga nakakalason na metabolite. Bilang resulta, unti-unting bumababa ang rate ng paglaki ng mga cell, na humahantong sa pagkamatay ng mga cell.
Secondary Cell Culture: Ang pangalawang cell culture ay nagpapahaba ng habang-buhay ng mga cell. Ang pana-panahong sub-culturing ay maaaring makabuo ng imortal na mga cell sa pamamagitan ng pagbabago o genetic alteration ng mga pangunahing cell.
Risk of Contamination
Primary Cell Culture: Ang mga pangunahing cell culture ay mas mahirap pangalagaan. Sa pangkalahatan, ang mga pangunahing kultura ng cell ay nangangailangan ng masaganang halo ng mga amino acid, micronutrients, ilang mga hormone at growth factor. Bilang resulta, ang panganib ng kontaminasyon sa mga pangunahing kultura ng cell ay mas mataas kaysa sa mga pangalawang kultura ng cell.
Secondary Cell Culture: Ang mga pangalawang cell culture ay medyo madaling mapanatili, at ang panganib ng kontaminasyon ay mas mababa kaysa sa mga pangunahing cell culture.
Sa artikulong ito, sinubukan naming maunawaan ang mga terminong pangunahing cell culture at pangalawang cell culture na sinusundan ng paghahambing upang i-highlight ang mga pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng mga ito. Ang pangunahing pagkakaiba ay namamalagi sa kung paano ang mga cell ay nagmula sa kultura; Ang mga cell para sa pangunahing cell culture ay direktang nakukuha mula sa tissue ng hayop o halaman, habang ang mga cell para sa pangalawang cell culture ay nakuha mula sa isang naitatag nang pangunahing kultura.
