Mahalagang Pagkakaiba – RNASE A vs RNASE H
Ang ribonucleases ay mga nucleases na partikular na nagpapababa ng RNA sa mas maliliit na unit. Maaari silang hatiin sa dalawang kategorya; endoribonucleases at exoribonucleases. Ang Endoribonuclease ay isang endonuclease na maaaring mag-degrade ng single stranded o double stranded RNA. Tinatanggal nito ang mga phosphodiester bond sa loob ng isang RNA polynucleotide chain. Ang mga halimbawa ay RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P at RNase H. Ang Exoribonuclease ay isang exonuclease na nagpapasama sa RNA sa pamamagitan ng pag-alis ng mga terminal nucleotide mula sa alinman sa 5'end o 3'end ng RNA molecule. Ang mga halimbawa ay RNase R, RNase II, RNase D at RNase PH. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng RNASE A at RNASE H ay ang RNase A ay isang pancreatic ribonuclease na partikular na nagpapababa ng single-stranded RNA sa mas maliliit na bahagi habang ang RNase H ay isang non-specific na enzyme na pinuputol ang RNA sa RNA-DNA hybrid sa mas maliliit na unit sa pamamagitan ng ang hydrolytic mechanism.
Ano ang RNASE A?
Ang RNase A ay isang pancreatic ribonuclease na partikular na pinuputol ang mga hindi pares na cytosine at uracil residues sa 3’ dulo ng single-stranded RNA. Gumagana ang RNase H sa mas mataas na konsentrasyon ng asin (0.3M o mas mataas na konsentrasyon ng NaCl). Ang hydrolytic reaction ay dalawang hakbang. Ito ay bumubuo ng isang 3' phosphorylated na produkto sa pamamagitan ng 2', 3' cyclic monophosphate intermediate. Bagama't partikular ito sa single-stranded RNA sa mas mataas na konsentrasyon ng asin, maaari rin nitong pababain ang double-stranded RNA at RNA sa RNA-DNA hybrid sa mas mababang konsentrasyon ng NaCl (mas mababa sa 0.3M NaCl).
Bruce Merrifield ang unang nag-synthesize ng enzyme na ito. Ang RNase A ay isang napaka-tanyag na enzyme sa molekular na pananaliksik. Ang bovine pancreatic RNase A ay isang halimbawa ng RNase A. At ito ay isa sa pinakamatibay na enzyme na ginagamit sa laboratoryo. Ang enzyme na ito ay hindi nangangailangan ng isang cofactor para sa aktibidad nito. Ito ay isang highly thermostable enzyme. Ang RNase A ay ang unang enzyme at ang pangatlong protina kung saan nakita ang tamang pagkakasunud-sunod ng amino acid. Ang enzyme na ito ay napakaliit na may 124 amino acid at molekular na masa na 12600da. At mayroon itong apat na Histidine residues (His 12 at His 119 na kasangkot sa catalytic reaction).
Figure 01: Ang RNase A
Maaaring ihiwalay ang RNase A sa pamamagitan ng pagpapakulo ng crude sample. Kapag kumukulo, ang lahat ng iba pang enzyme ay nagpapababa ng natitirang RNase A. Ang RNase A ay isang kamangha-manghang matatag na enzyme. Ang enzyme na ito ay humahadlang sa ribonuclease inhibitor protein, heavy metal at uridine vanadate complexes.
Ano ang RNase H?
Ang RNase H ay isang nonspecific ribonuclease enzyme na maaaring magpababa ng RNA sa RNA-DNA hybrid sa pamamagitan ng hydrolytic reaction. Tinatanggal ng RNase H ang 3'- ang OP na bono ng RNA sa isang RNA-DNA hybrid. Sa huli ito ay gumagawa ng 3'OH at 5' na mga produktong tinapos ng pospeyt. Sa pagtitiklop ng DNA ito ay gumaganap ng isang mahalagang papel sa pamamagitan ng pag-alis ng RNA primer pagkatapos mabuo ang mga bagong hibla ng DNA. Sa mga kondisyon ng laboratoryo, partikular nitong pinapababa ang RNA sa RNA-DNA hybrid ngunit hindi ang DNA at unhybridized na RNA. At kadalasang ginagamit ang enzyme na ito para sirain ang template ng RNA pagkatapos mabuo ang unang complementary DNA strand sa panahon ng cDNA synthesis.
Figure 02: RNase H
Gumagamit din ang RNase H sa mga pagsusuri sa proteksyon ng nuclease. Maaari rin itong isama sa pag-alis ng poly A tail mula sa mRNA. Ang RNase H ay may kakayahang sirain ang non-coding RNA sa loob at labas ng cell. Ang mga metal ions ay kinakailangan bilang mga cofactor para sa aktibidad ng protina na ito. Maaaring gumamit ng chelator (EDTA) para pigilan ang RNase H enzyme.
Ano ang Pagkakatulad sa pagitan ng RNASE A at RNASE H?
- Parehong may likas na protina.
- Parehong endoribonuclease
- Parehong maaaring pababain ang RNA.
- Parehong gumaganap ng hydrolytic reactions.
- Gumagamit ang mga molekular na laboratoryo sa parehong mga ito.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng RNASE A at RNASE H?
RNASE A vs RNASE H |
|
| Ang RNase A ay isang pancreatic ribonuclease na partikular na naghihiwalay sa 3’ dulo ng hindi pares na cytosine at uracil residues ng single-stranded RNA sa mas mataas na konsentrasyon ng asin. | Ang RNase H ay isang nonspecific ribonuclease enzyme na maaaring magpababa ng RNA sa RNA-DNA hybrid sa pamamagitan ng hydrolytic reaction. |
| Kalikasan ng RNA Cleaving | |
| RNase A ay partikular na pinuputol ang single-stranded RNA sa mas mataas na konsentrasyon ng asin. | RNase H ay pinuputol ang RNA sa RNA- DNA hybrid. |
| Need of Co-factor for Activity | |
| RNase A ay hindi nangangailangan ng mga cofactor para sa aktibidad nito. | RNase H ay nangangailangan ng mga metal ions bilang cofactor para sa aktibidad nito. |
| Inhibitors of Protein Activity | |
| Ribonuclease inhibitor protein, heavy metal at uridine vanadate complexes ay pumipigil sa aktibidad ng RNAse A. | Ang isang chelator (EDTA) ay humahadlang sa aktibidad ng RNase H. |
| RNA Primer Removal sa DNA Replication | |
| RNase A ay hindi ginagamit para sa RNA primer removal sa DNA replication. | RNase H ay ginagamit para sa RNA primer removal sa DNA replication |
| Pag-alis ng Template ng DNA sa Complementary DNA (C-DNA) Synthesis | |
| RNase A ay hindi ginagamit para sa pagtanggal ng template ng RNA sa panahon ng complementary DNA (C-DNA) synthesis. | RNase H ay ginagamit para sa pagtanggal ng template ng RNA sa panahon ng complementary DNA (C-DNA) synthesis. |
| Pag-alis ng Poly-A-Tail sa mRNA Hybridized to Oligo (dt) | |
| RNase A ay hindi ginagamit upang alisin ang “poly-A tail” sa mRNA na na-hybrid sa oligo (dt). | RNase H ay ginagamit upang alisin ang “poly-A tail” sa mRNA na na-hybrid sa oligo (dt) |
Buod – RNASE A vs RNASE H
Ang ribonucleases ay mga nuclease enzyme na may kakayahang hatiin ang RNA sa mas maliliit na unit. Sila ay dalawang uri; endoribonucleases at exoribonucleases. Ang Endoribonuclease ay isang endonuclease na may kakayahang pababain ang single-stranded o double-stranded RNA. At pinuputol nito ang phosphodiester bond sa loob ng isang RNA polynucleotide chain. Ang RNase A at RNase H ay dalawang endoribonucleases. Ang RNase A ay isang pancreatic ribonuclease na partikular na nag-aalis ng hindi pares na mga residue ng cytosine at uracil sa 3' dulo ng single-stranded RNA sa mas mataas na konsentrasyon ng asin. Ang RNase H ay isang nonspecific ribonuclease enzyme na maaaring magpababa ng RNA sa RNA-DNA hybrid sa pamamagitan ng hydrolytic reaction. Ito ang pagkakaiba sa pagitan ng RNase A at RNase H.
I-download ang PDF RNASE A vs RNASE H
Maaari mong i-download ang PDF na bersyon ng artikulong ito at gamitin ito para sa mga offline na layunin ayon sa tala ng pagsipi. Paki-download ang bersyon ng PDF dito Pagkakaiba sa pagitan ng RNASE A at RNASE H
