Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng Klenow fragment at DNA polymerase 1 ay ang Klenow fragment ay isang malaking bahagi ng DNA polymerase 1 na walang 5′ hanggang 3′ exonuclease na aktibidad habang ang DNA polymerase ay isang enzyme ng E. coli na mayroong tatlo. mga domain kabilang ang 5′ hanggang 3′ exonuclease na aktibidad.
Ang DNA polymerase ay isa sa mga pangunahing enzyme na kasangkot sa pagtitiklop ng DNA sa mga buhay na organismo. Mayroong iba't ibang anyo ng DNA polymerase enzyme na matatagpuan sa eukaryotes at prokaryotes batay sa laki at hugis. Ang DNA polymerase 1, 2 at 3 ay matatagpuan lamang sa mga prokaryotic na organismo, at gumaganap sila ng iba't ibang papel sa pagtitiklop ng DNA. Ang DNA polymerase 1 ay may tatlong domain na may 5′ hanggang 3′ polymerase, 3′ hanggang 5′ exonuclease na aktibidad at 5′ hanggang 3′ exonuclease na aktibidad. Ang fragment ng Klenow ay isang proteolytic na produkto ng DNA polymerase 1. Nagtataglay ito ng 5 hanggang 3′ polymerase at 3′ hanggang 5′ exonuclease na aktibidad ng buo na DNA polymerase 1, ngunit wala itong 5′ hanggang 3′ exonuclease na aktibidad.
Ano ang Klenow Fragment?
Ang Klenow fragment ay isang malaking bahagi ng DNA polymerase 1. Hindi tulad ng DNA polymerase 1, 5′ to 3′ exonuclease activity ay hindi nakikita sa Klenow fragment dahil kulang ito ng 5′ to 3′ forward exonuclease domain. Ginagawa ang mga fragment ng Klenow sa pamamagitan ng pagtunaw ng DNA polymerase 1 na may protease na tinatawag na subtilisin, na isang enzyme na natutunaw ng protina. Sa ilang mga aplikasyon, ang 3′ hanggang 5′ exonuclease na aktibidad ng fragment ng Klenow ay nagiging hindi kanais-nais. Maaari itong alisin sa pamamagitan ng pagpapakilala ng mutation sa gene na nag-encode sa Klenow fragment. Ang nagreresultang enzyme na mayroon lamang 5′ hanggang 3′ polymerase na aktibidad ay kilala bilang exo-Klenow fragment. Sa morphologically, ang fragment ng Klenow ay kahawig ng kanang kamay ng tao. Mayroon itong N-terminal 3′-5′ exonuclease domain at ang C-terminal polymerase domain na pinaghihiwalay ng humigit-kumulang 30 A.
Figure 01: Klenow Fragment at DNA Polymerase 1
Ang Klenow fragment ay isang mahalagang tool sa molecular biological techniques. Maraming gamit ang mga fragment ng Klenow. Napakahalaga ng mga ito sa blunt-end cloning upang makagawa ng mga blunt na fragment. Ang mga fragment ng Klenow ay maaaring mag-alis ng 3′ overhang o punan ang 5′ overhang upang bumuo ng mapurol na mga dulo. Bukod dito, ang mga fragment ng Klenow ay ginagamit upang i-synthesize ang double-stranded na DNA mula sa mga single strand. Higit pa rito, ginagamit ang mga ito para maghanda ng radioactively labeled probes gamit ang 5’to 3′ DNA dependent DNA polymerase activity.
Ano ang DNA Polymerase 1?
Ang DNA polymerase 1 (Pol 1) ay isang enzyme na matatagpuan sa mga prokaryote na kailangan para sa bacterial DNA replication. Ito ang unang uri ng DNA polymerase na natuklasan ni Arthur Kornberg noong 1956. Ang Pol 1 ay ang pinaka-masaganang polymerase sa E. coli. Ito ay naka-encode ng gene polA at binubuo ng 928 amino acids. Binubuo ito ng tatlong domain. Ang lahat ng tatlong domain ay gumaganap ng mga natatanging function. Dalawang domain ang nagsasagawa ng 5′ hanggang 3′ exonuclease na aktibidad at 3′ hanggang 5′ exonuclease na aktibidad. Dahil sa aktibidad na ito na taglay ng Pol 1, sikat ito bilang DNA repairing enzyme kaysa sa DNA replicating enzyme. Ang ikatlong domain ay may kakayahang mag-catalyze ng maraming polymerization (5′ hanggang 3′) bago ang paglabas ng template na DNA at pagkonekta ng mga fragment ng Okazaki nang magkasama sa pamamagitan ng pagpuno ng bagong DNA at pag-alis ng mga primer ng RNA.
Figure 02: DNA Polymerase
Ang Pol 1 na nakahiwalay sa E Coli ay malawakang ginamit sa mga molecular application. Gayunpaman, sa sandaling natuklasan ang Taq Polymerase, pinalitan nito ang E Coli Pol 1 sa teknolohiya ng PCR. Ang Taq polymerase ay uri ng thermostable DNA polymerase na kabilang sa Pol 1.
Ano ang Pagkakatulad sa pagitan ng Klenow Fragment at DNA Polymerase 1?
- Ang fragment ng Klenow ay isang malaking bahagi ng DNA polymerase 1.
- Mayroon silang 5’to 3′ DNA dependent DNA polymerase activity at 3’to 5′ exonuclease activity na namamagitan sa proofreading.
- Ginagamit ang mga ito para sa maraming layunin.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Klenow Fragment at DNA Polymerase 1?
Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng Klenow fragment at DNA polymerase 1 ay ang Klenow fragment ay walang 5′ hanggang 3′ exonuclease na aktibidad habang ang DNA polymerase 1 ay may 5′ hanggang 3′ exonuclease na aktibidad. Samakatuwid, ang fragment ng Klenow ay may dalawang domain, habang ang DNA polymerase 1 ay mayroong lahat ng tatlong domain.
Sa ibaba ng infographic ay nagpapakita ng higit pang mga detalye ng pagkakaiba sa pagitan ng Klenow fragment at DNA polymerase 1.
Buod – Klenow Fragment vs DNA Polymerase 1
Ang DNA polymerase 1 ay isang enzyme ng E. coli na mayroong tatlong domain bilang 5′ hanggang 3′ polymerization domain, 3′ to 5′ exonuclease domain at 5′ to 3′ exonuclease domain. Ang fragment ng Klenow ay isang malaking bahagi ng DNA polymerase. Kulang ito ng isang domain ng DNA polymerase 1, na siyang 5′ hanggang 3′ exonuclease domain. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng fragment ng Klenow at DNA polymerase 1 ay ang mga fragment ng Klenow ay walang 5′ hanggang 3′ exonuclease domain habang ang DNA polymerase 1 ay may 5′ hanggang 3′ exonuclease domain.
