Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng chromatofocusing at isoelectric focusing ay ang chromatofocusing ay isang uri ng column chromatography method na gumagamit ng ion exchange resins habang ang isoelectric focusing ay isang uri ng electrophoresis technique na gumagamit ng immobilized pH gradient gels.
Ang Chromatofocusing at isoelectric focusing ay dalawang technique na naghihiwalay sa mga protina ayon sa kanilang isoelectric point. Ang parehong chromatofocusing at isoelectric na pagtutok ay may mahusay na paglutas ng kapangyarihan. Ang Chromatofocusing ay isang high-resolution na column chromatography na paraan habang ang isoelectric na pagtutok ay isang electrophoretic separation method. Bukod dito, ang chromatofocusing ay hindi gumagamit ng electric field habang ang isoelectric focusing ay nangangailangan ng electric field.
Ano ang Chromatofocusing?
Ang Chromatofocusing ay isang uri ng high elution chromatography na naghihiwalay sa mga protina ayon sa mga pagkakaiba sa kanilang isoelectric point. Gumagamit ito ng ion exchange resin column at isang internally developed pH gradient. Hindi tulad ng isoelectric focusing, ang chromatofocusing ay hindi nagsasangkot ng electric field. Ang Chromatofocusing ay isang makapangyarihang pamamaraan sa pagdalisay na kayang lutasin ang lubos na magkatulad na mga molekula kahit na may pagkakaiba lamang ng 0.02 pH unit. Samakatuwid, ang chromatofocusing ay pinakaangkop bilang isang pangwakas na hakbang sa pag-polish kapag ang mataas na resolution ay kinakailangan sa paghihiwalay ng halos magkatulad na mga bahagi.
Sa chromatofocusing, inilalapat ang sample sa column sa pamamagitan ng paghahalo nito sa start buffer. Ang mga protina na nasa pH sa itaas ng kanilang isoelectric point ay negatibong na-charge at nananatili sila malapit sa tuktok ng column habang ang ibang mga protina na nasa pH sa ibaba ng kanilang isoelectric point, ay lumilipat pababa sa column. Ang protina na may pinakamataas na isoelectric point ay unang na-eluted habang ang protina na may pinakamababang isoelectric point ay huling na-eluted mula sa column. Naaapektuhan ang diskarteng ito ng ilang salik gaya ng pag-ulan ng protina at linearity ng pH gradient.
Ano ang Isoelectric Focusing?
Ang Isoelectric focusing ay isang technique na naghihiwalay sa iba't ibang molecule batay sa kanilang isoelectric point. Ito ay kilala rin bilang electrofocusing. Ang pamamaraan na ito ay kadalasang ginagamit para sa paghihiwalay ng protina sa isang gel. Sa isoelectric focusing, ang sample ay idinagdag sa immobilized pH gradient (IPG) gels. Ang IPG gel ay isang acrylamide gel matrix na copolymerized na may pH gradient. Ang mga protina ay lumilipat patungo sa katod hanggang sa mahanap nila ang pH na rehiyon ng kanilang mga isoelectric na puntos. Kapag ang isang protina ay umabot sa pH na walang netong singil, hihinto ang paglipat at nagbibigay ng isang nakatigil na banda. Gayundin, ang bawat protina ay nagbibigay ng banda sa isang punto sa pH gradient na tumutugma sa isoelectric point nito.
Figure 01: Isoelectric Focusing
Ang Isoelectric focusing ay ang unang hakbang ng two-dimensional gel electrophoresis. Sa diskarteng iyon, ang mga protina ay unang pinaghihiwalay ayon sa kanilang mga isoelectric na puntos sa pamamagitan ng isoelectric na pagtutok at pagkatapos ay pinaghihiwalay ng kanilang molecular weight sa pamamagitan ng SDS-PAGE.
Ano ang Mga Pagkakatulad sa pagitan ng Chromatofocusing at Isoelectric Focusing?
- Chromatofocusing at isoelectric focusing ay dalawang napakahusay na paraan ng paglutas.
- Parehong nakabatay sa isoelectric point ng mga protina.
- Ang mga diskarteng ito ay gumagamit ng pH gradient.
- Ang parehong mga pamamaraan ay nagbibigay-kaalaman para sa paglalarawan ng mga variant ng hemoglobin ng tao.
- Maaari nilang lutasin ang mga molekula kung saan nagkakaiba ang mga halaga ng pI nang kasing liit ng 0.02 pH unit.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Chromatofocusing at Isoelectric Focusing?
Ang Chromatofocusing ay isang high-resolution na column chromatography technique na naghihiwalay sa mga protina ayon sa kanilang isoelectric point. Sa kaibahan, ang isoelectric focusing ay isang electrophoretic technique na naghihiwalay sa mga protina ayon sa kanilang isoelectric point sa pamamagitan ng paggamit ng isang electric field kasama ang pH gradient na nabuo sa isang capillary. Kaya, ito ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng chromatofocusing at isoelectric focusing.
Ang isa pang pagkakaiba sa pagitan ng chromatofocusing at isoelectric focusing ay ang chromatofocusing ay hindi nagsasangkot ng electric field habang ang isoelectric focusing ay nangangailangan ng electric field.
Buod – Chromatofocusing vs Isoelectric Focusing
Ang Chromatofocusing at isoelectric focusing ay dalawang magkatulad na pamamaraan na may mataas na kakayahan sa pagresolba ng mga molekula, lalo na ang mga halos magkatulad na molekula. Ang Chromatofocusing ay isang high-resolution na column chromatography technique habang ang isoelectric focusing ay isang electrophoresis method. Ang Chromatofocusing ay hindi nagsasangkot ng isang electric field, hindi katulad ng isoelectric na pagtutok. Kaya, ibinubuod nito ang pagkakaiba sa pagitan ng chromatofocusing at isoelectric focusing.
