Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng gel filtration at affinity chromatography ay ang gel filtration chromatography ay nakadepende sa mga pagkakaiba sa molecular weight o laki ng analyte sample, samantalang ang affinity chromatography ay nakadepende sa affinity ng isang analyte sa isang immobilized ligand.
Ang terminong chromatography sa analytical chemistry ay tumutukoy sa proseso ng paghihiwalay ng mga bahagi sa isang timpla gamit ang iba't ibang pamamaraan. Ang Chromatography ay isang kolektibong pangalan na kumakatawan sa iba't ibang bilang ng iba't ibang paraan para sa paghihiwalay.
Ano ang Gel Filtration Chromatography?
Ang Gel filtration chromatography ay isang analytical technique kung saan ang paghihiwalay ng mga bahagi ay depende sa pagkakaiba sa molecular weight o size. Ang diskarteng ito ay kilala rin bilang size-exclusion chromatography o molecular-sieve chromatography. Ang pamamaraan ng paghihiwalay sa prosesong ito ay nakasalalay sa magkakaibang kakayahan ng mga molekula sa sample na pumasok sa mga pores ng medium-filtration medium.
Sa pamamaraan ng pagsasala ng gel, ang nakatigil na yugto ay naglalaman ng mga butil ng hydrated, mala-sponge na materyal na may mga pores ng molekular na dimensyon na naglalaman ng makitid na hanay ng mga sukat. Kung magpapasa tayo ng isang may tubig na solusyon na binubuo ng mga molekula na may iba't ibang laki sa pamamagitan ng isang column na naglalaman ng mga "molecular sieves," ang mga molekula na mas malaki kaysa sa mga pores ng filtration medium ay mabilis na gumagalaw sa column. Sa kaibahan, ang mas maliliit na molekula ay pumapasok sa mga pores ng gel at malamang na gumagalaw nang mabagal sa haligi. Ang mga molekula ay naglalabas mula sa hanay sa pagkakasunud-sunod ng pagpapababa ng laki ng molekular. Dito, ang limitasyon sa pagbubukod ng gel ay ang molecular mass ng pinakamaliit na molekula na hindi nakapasok sa mga pores ng isang partikular na gel.
May iba't ibang uri ng mga diskarte sa pag-filter ng gel, tulad ng hindi direktang paraan ng pagsasala ng gel, steady-state na gel filtration, gel bead dialysis, atbp. Ang indirect gel filtration chromatography ay kapaki-pakinabang sa pagtukoy ng mga libreng thyroid hormone. Ang steady-state gel filtration chromatography ay isang hindi direktang pamamaraan na kadalasang kapaki-pakinabang para sa pagsukat ng mga libreng steroid tulad ng cortisol, testosterone, atbp. Ang gel bead dialysis, sa kabilang banda, ay isang pagbabago ng steady-state gel filtration na medyo mas simple.
Ano ang Affinity Chromatography?
Ang Affinity chromatography ay isang analytical technique at isang separation method na nakadepende sa isang partikular na binding interaction sa pagitan ng immobilized ligand at ang binding partner nito. Kasama sa ilang halimbawa ang antibody-antigen binding, enzyme-substrate binding, at enzyme-inhibitor binding. Samakatuwid, ang diskarteng ito ay maraming mahalagang aplikasyon sa nucleic acid purification, protein purification mula sa cell extracts, at purification mula sa dugo.
Sa pamamaraang ito, ang pinakamahalagang katangian ay ang ligand immobilization. Maaari tayong gumamit ng iba't ibang materyales tulad ng acrylates at silica gel para dito. Mahalagang maiwasan ang steric na interference ng target na molekula sa ligand. Bukod dito, ang isang inhibitor ay nakakabit sa solid phase. Tinatawag namin itong inhibitor na isang spacer. Karaniwan, ang spacer ay binubuo ng isang hydrocarbon chain.
Ang nakatigil na yugto ng affinity chromatography ay naglalaman ng core, spacer, at ligand. Minsan, mayroon din itong metal na ion na ikinakabit sa ligand. Ang pinaka-ginustong solid phase para sa nakatigil na yugto sa diskarteng ito ay agarose gel dahil madali itong ibigay upang punan at i-pack ang column ng mga resin bed sa anumang laki, at ito ay sapat na malaki para malayang dumaloy ang mga biomolecules papunta at sa pamamagitan ng mga kuwintas. Ang mga ligand ay maaaring magkabit ng covalent sa bead polymer sa iba't ibang paraan. Ang pinakakaraniwang spacer compound ay cyanogen bromide, epoxide, epoxide na may C6 acid, at diamin. Sa kabilang banda, iba-iba ang ligand na magagamit natin ayon sa target, hal., antibody-antigen, iron o aluminum ions-phosphoproteins, avidin-biotin, glutathione-GST, chelator-His-tagged proteins, atbp.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Gel Filtration at Affinity Chromatography?
Ang Chromatography ay isang mahalagang analytical technique. Ang gel filtration chromatography at affinity chromatography ay dalawang mahalagang variation ng chromatography. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng gel filtration at affinity chromatography ay ang gel filtration chromatography ay nakasalalay sa mga pagkakaiba sa molekular na timbang o laki ng sample ng analyte, samantalang ang affinity chromatography ay nakasalalay sa affinity ng isang analyte sa isang immobilized ligand.
Buod – Gel Filtration vs Affinity Chromatography
May iba't ibang uri ng chromatographic technique ayon sa kanilang aplikasyon at katangian ng sample ng analyte. Ang pagsasala ng gel at affinity chromatography ay dalawang uri ng mga diskarte. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng gel filtration at affinity chromatography ay ang gel filtration chromatography ay nakadepende sa mga pagkakaiba sa molecular weight o laki ng analyte sample, samantalang ang affinity chromatography ay nakadepende sa affinity ng isang analyte sa isang immobilized ligand.
