Mahalagang Pagkakaiba – Warm vs Cold Trypsinization
Ang
Warm at Cold Trypsinization ay dalawang paraan na ginagamit sa enzymatic disaggregation ng mga cell sa animal cell culturing. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng mainit at malamig na trypsinization, tulad ng iminumungkahi ng mga pangalan, ay nakasalalay sa temperatura kung saan idinagdag ang trypsin para sa cellular disaggregation. Nagaganap ang mainit na trypsinization sa ilalim ng mas mataas na mga kondisyon ng temperatura (36.5 – 37 0C) samantalang ang malamig na trypsinization ay nagaganap sa ilalim ng mga kondisyong mababa ang temperatura.
Sa panahon ng proseso ng pangunahing cell culturing ng mga selula ng hayop, mayroong tatlong pangunahing pamamaraan na ginamit at napatunayang matagumpay. Kasama sa tatlong pamamaraan ang mekanikal na disaggregation ng mga cell, enzymatic disaggregation ng mga cell at ang pangunahing pamamaraan ng explant. Ang enzymatic disaggregation ng mga cell na humahantong sa paghihiwalay ng mga cell at ito ay ginagawa ng protein-degrading enzyme trypsin. Samakatuwid, ang prosesong ito ay kilala bilang Trypsinization. Ang trypsinization ay maaaring gawin sa ilalim ng dalawang magkaibang kundisyon katulad ng Warm Trypsinization at Cold Trypsinization. Ang warm trypsinization ay ang paraan ng paggamot sa mga cell gamit ang trypsin sa ilalim ng mainit na kondisyon sa temperatura na 36.5 – 37 0C. Ang malamig na trypsinization ay ang proseso ng paggamot sa trypsin na nagaganap sa mas malamig na mga kondisyon, mas mabuti sa yelo na nagpapanatili ng napakababang temperatura.
Ano ang Warm Trypsinization?
Trypsinization ay maaaring gawin upang paghiwalayin ang mga bahagi ng cellular upang ihiwalay ang mga cell upang makabuo ng isang pangunahing kultura ng cell. Ang trypsin ay isang enzyme na nagpapababa ng protina, at ang pinaghalong enzyme na ginagamit sa trypsinization ay maaaring alinman sa isang krudo na katas o isang purified na produkto. Sinasabing mas mahusay ang crude extract sa protein lysis at cell disintegration dahil naglalaman ito ng iba pang degradative enzymes.
Warm trypsinization ay ang pinakakaraniwang ginagamit na enzymatic na paraan para sa cell disaggregation na nagaganap sa ilalim ng mas mataas na temperatura. Bago ang paggamot sa pamamagitan ng trypsinization, ang nais na tissue ay tinadtad sa mas maliliit na piraso. Pinapadali nito ang madaling proseso ng paghihiwalay. Pagkatapos ay hinuhugasan ang tinadtad na tissue sa isang espesyal na media na kilala bilang Dissection Basal S alt medium.
Pagkatapos ng hakbang sa paghuhugas, ang mga cell ay nagiging isang flask na naglalaman ng aktibong enzyme, na trypsin. Dahil ang diskarteng ito ay nagpapahiwatig ng mainit na trypsinization protocol, ang trypsin ay inilalagay sa temperatura na humigit-kumulang 37 0C sa loob ng halos apat na oras.
Figure 01: Trypsin
Ang mga nilalaman ay halo-halong at nabalisa sa pamamagitan ng paggamit ng mga pamamaraan ng centrifugation para sa kadalian ng protocol at upang mapabilis ang proseso ng paghihiwalay. Kapag naabot na ang inirerekomendang oras, maaaring makuha ang mga cell mula sa supernatant. Ang mga cell na nakuha mula sa supernatant ay pagkatapos ay incubated sa isang partikular na temperatura at oras.
Ano ang Cold Trypsinization?
Ang malamig na trypsinization ay ang iba pang uri ng trypsinization na nagaganap sa ilalim ng malamig na mga kondisyon. Sa pamamaraang ito, ang mga cell na tinadtad at hinugasan ay inilalagay sa mga vial sa yelo at pagkatapos ay binabad sa trypsin. Ang panahon ng pagbababad ay mas matagal – mga 6 – 24 na oras.
Pagkatapos makumpleto ang pamamaraan ng pagbababad, ang trypsin ay aalisin sa cell lysate, at ang mga piraso ng tissue ay ipapalumo pa sa 37 0C sa loob ng mga 20 – 30 minuto. Ang disaggregation ng mga cell ay dala ng paulit-ulit na pipetting ng tissue mixture. Papayagan nito ang mga cell na maghiwalay mula sa lamad at makarating sa supernatant. Kapag ang mga cell ay nasa supernatant, sila ay incubated at lumaki sa nais na temperatura at tagal ng panahon.
Ang malamig na paraan ng trypsinization ay may ilang mga pakinabang
- Mas mataas na yield ng mga viable na cell habang nababawasan ang pinsala sa cell. Ang pinsala sa cell ay mababawasan sa pamamagitan ng hindi paggamit ng mga hakbang sa centrifugation.
- Lubos na maginhawang paraan.
- Hindi gaanong matrabaho.
Ang pangunahing limitasyon ng paraan ng malamig na trypsinization ay ang malalaking dami ay hindi magagamit sa isang pagkakataon.
Ano ang Pagkakatulad sa pagitan ng Warm at Cold Trypsinization?
- Ang parehong Warm at Cold Trypsinization na proseso ay gumagamit ng enzyme trypsin para sa disaggregation ng mga cell.
- Ang parehong Warm at Cold Trypsinization na proseso ay ginagamit sa mga pamamaraan ng cell culture para sa disaggregation ng mga cell.
- Sa parehong Warm at Cold Trypsinization treatment procedures, ang mga cell ay nagmula sa supernatant.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng Mainit at Malamig na Trypsinization?
Warm vs Cold Trypsinization |
|
| Warm trypsinization ay ang paraan ng paggamot sa mga cell gamit ang trypsin sa ilalim ng mainit na kondisyon sa temperaturang 36.5 – 37 0. | Ang malamig na trypsinization ay ang proseso ng paggamot sa trypsin na nagaganap sa mas malamig na mga kondisyon, mas mabuti sa yelo na nagpapanatili ng napakababang temperatura. |
| Protocol | |
| Ang mga tinadtad na piraso ng tissue ay pinananatili sa 37 0C tuloy-tuloy sa buong pamamaraan. | Ang mga tinadtad na piraso ng tissue ay unang pinananatili sa malamig na temperatura at pagkatapos ay pinananatili sa 37 0. |
| Temperature | |
| Ang warm trypsinization ay nangyayari sa 36.5 – 37 0 | Nangyayari ang malamig na trypsinization sa malamig na temperatura. |
| Naubos na Oras | |
| Mas kaunting oras na kinakailangan para sa buong proseso (humigit-kumulang 4 na oras) ng mainit na trypsinization. | Kailangan ng mas mahabang oras (mga 6 – 24 na oras) para sa malamig na trypsinization. |
| Yield of Viable Cells | |
| Mababa sa mainit na trypsinization. | Mataas sa malamig na trypsinization. |
| Paggamit ng Centrifugation | |
| Kinakailangan ang centrifugation para sa disaggregation ng mga cell sa mainit na trypsinization. | Hindi kailangan ang centrifugation sa cold trypsinization. |
| Initial Tissue Quantity para sa Trypsinization | |
| Maaaring gumamit ng mas malaking dami ng tissue sa mainit na trypsinization. | Maaaring gumamit ng mas maliit na dami ng tissue sa cold trypsinization. |
| Cell Damage | |
| Mataas dahil sa centrifugation sa mainit na trypsinization. | Mas mababa dahil sa malamig na trypsinization. |
Buod – Warm vs Cold Trypsinization
Ang
Trypsinization ay ang paraan ng paggamit ng protein-degrading enzyme trypsin para sa disaggregation at paghahanda ng mga pangunahing cell culture sa panahon ng proseso ng cell culturing. Mayroong dalawang pangunahing pamamaraan ng trypsinization batay sa mga temperatura na ginamit sa panahon ng pamamaraan. Ang mga ito ay mainit at malamig na trypsinization. Isinasagawa ang warm trypsinization sa 37 0C samantalang ang cold trypsinization ay isinasagawa sa ilalim ng malamig na mga kondisyon. Bagama't ang malamig na trypsinization ay tumatagal ng mas mahabang oras para makumpleto, ito ay sinasabing may mas mataas na ani ng mga mabubuhay na selula. Ito ay dahil sa ang katunayan na ang pinsala sa cell ay pinaliit sa malamig na trypsinization dahil hindi ito gumagamit ng masiglang mga hakbang sa centrifugation. Ito ang pagkakaiba sa pagitan ng mainit at malamig na trypsinization.
