Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng GFP at EGFP ay ang GFP ay isang wild-type na protina na kasama sa molecular cloning ng mga non-mammalian cells habang ang EGFP ay isang pinahusay o engineered na uri ng GFP na magagamit sa mga mammalian cells.
Ang Molecular cloning ay isang advanced na pamamaraan na ginagamit ng mga siyentipiko sa pagpapahayag ng mga protina sa pamamagitan ng recombinant na teknolohiya. Sa teknolohiyang recombinant DNA, kinakailangan na matagumpay na ibahin ang anyo ng recombinant vector upang maging host organism. Samakatuwid, sa panahon ng proseso ng pagbabago, dapat itong makilala at kumpirmahin kung ang gene ng interes ay nabago o hindi sa host. Upang masuri ito, ang mga molecular biologist ay gumagamit ng ilang mga pamamaraan. Sa mga diskarteng iyon, ang isa ay reporter gene. Ang mga reporter gene na ito ay kumikilos bilang mga mapipiling marker para piliin ang mga tamang transformant. Kaya, ang Green Fluorescent Protein (GFP) at Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) ay dalawang reporter protein na ginagamit sa molecular cloning.
Ano ang GFP?
Ang GFP ay isang wild-type na protina na naglalaman ng 238 residue ng amino acid at ilang mapipiling rehiyon ng mga sequence ng amino acid na nagpapaiba nito sa iba pang mga fluorescent na protina. Higit pa rito, ang wild-type na protina na ito ay orihinal na nakahiwalay sa Aequorea Victoria; isang uri ng dikya. Gayunpaman, sa mga natural na phenomena, ang dikya ay nakagawa ng berdeng kulay na fluorescence bilang tugon sa ilang partikular na stimuli.
Kanina, nagulat ang konseptong ito sa mga siyentipiko, at nagpasya silang gamitin ito sa kanilang mga recombinant na teknolohiya ng DNA. Dahil dito, ginamit ng mga siyentipiko ang mutant form na ito ng wild-type na gene bilang isang reporter gene sa kanilang mga pag-aaral sa expression ng gene. Ang wild-type na gene ng GFP ay may kakayahang gumawa ng isang protina na nagbibigay ng fluorescence sa temperatura ng silid o sa ilalim ng UV light. Samakatuwid, kapag ipinasok sa mga transformant, ito ay nagpapahayag at gumagawa ng fluorescence. Kung nagreresulta ang fluorescence pagkatapos ng proseso ng pagbabago, kinukumpirma nito ang tagumpay ng proseso ng pagbabago. Sa simpleng salita, ang fluorescence emission ay nagpapahiwatig ng matagumpay na pagbabago ng vector na nagdadala ng gene ng interes sa host.
Figure 01: GFP
Dahil sa kadahilanang ito, gumaganap ang GFP bilang in vivo marker ng gene expression. Sa kasalukuyan, ginagamit ang genetic engineering techniques para makagawa ng GFP. Gayundin, maraming pinahusay na bersyon ng GFP gaya ng EGFP ang available. Kaya naman, binibigyang-daan nito ang mahusay na paggamit ng GFP sa molecular cloning at pag-aaral ng gene expression.
Ano ang EGFP?
Ang Enhanced Green Fluorescent Protein o EGFP ay isang pinahusay na bersyon ng GFP. Sa simpleng salita, maaari naming tukuyin ang EGFP bilang isang engineered na bersyon ng wild-type na GFP. Kapag nag-mutate ang wild-type na gene ng GFP, nagdudulot ito ng mga kapaki-pakinabang na epekto. Kaya, ang mutated gene ng GFP ay nagbibigay-daan sa pagpapahayag ng mga bagong character, at bilang resulta nito, makakagawa kami ng Pinahusay na GFP na may pinabuting mga katangian. Higit pa rito, maaari nating ipakilala ang mga mutasyon nang matagumpay sa wild-type na GFP gene gamit ang irradiation o mga kemikal na pamamaraan. Ang mga mutated gene na ito ay gumagawa ng EGFP, na may mas kapaki-pakinabang na katangian.
Figure 02: EGFP
Ang mga pinahusay na katangian ng EGFP ay ang mga sumusunod;
- Nakapaglabas ng mas malalakas na fluorescence signal.
- May mataas na sensitivity.
- Maaari itong gamitin sa mammalian cells sa halip na mga prokaryote at iba pang lower level eukaryotes.
- Gayundin, nagbibigay ng mas mataas na kadalisayan ng produkto.
Samakatuwid, kung ihahambing sa GFP, ang EGFP ay ang ginustong pagpipilian para sa pag-aaral ng expression ng gene. Gayunpaman, mas mahal ang produkto kumpara sa GFP.
Ano ang Pagkakatulad sa pagitan ng GFP at EGFP?
- Ang GFP at EGFP ay dalawang protina na may kakayahang maglabas ng berdeng kulay
- Samakatuwid, parehong gumaganap bilang mga protina ng reporter sa mga pag-aaral ng expression ng gene.
- Gayundin, posibleng i-synthesize ang dalawa gamit ang recombinant DNA technology.
- Higit pa rito, madaling i-mutate ang dalawang uri na ito para ma-synthesize ang mga pinahusay na form.
Ano ang Pagkakaiba sa pagitan ng GFP at EGFP?
Ang reporter gene ay isang gene na nakakabit sa gene ng interes sa recombinant DNA technology. Ito ay nagpapahiwatig ng matagumpay na pagbabago ng recombinant vector sa host. Dito, ang GFP at EGFP ay dalawang uri ng berdeng florescent na protina na gumagana bilang mga protina ng reporter. Gayunpaman, ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng GFP at EGFP ay ang GFP ay isang wild-type habang ang EGFP ay isang engineered na bersyon ng GFP. Higit pa rito, ang EGFP ay may mas kapaki-pakinabang na katangian kaysa sa GFP. Halimbawa, ang EGFP ay gumagawa ng mas malakas na fluorescent light at mas sensitibo kaysa sa GFP. Ang isa pang pagkakaiba sa pagitan ng GFP at EGFP ay ang mga system kung saan natin magagamit ang mga ito. Ang mga non-mammalian system ay gumagamit ng GFP habang ang mga mammalian system ay gumagamit ng EGFP.
Ang infographic sa ibaba ay nagpapakita ng pagkakaiba sa pagitan ng GFP at EGFP sa tabular form.
Buod – GFP vs EGFP
Ang GFP at EGFP ay mga reporter protein sa molecular cloning at pag-aaral ng gene expression. Ang GFP ay ang wild-type na protina, na isang berdeng fluorescent na protina. Ang protina sa una ay nakahiwalay mula sa dikya na Aequorea victoria. Sa kaibahan, ang EFGP ay isang pinahusay na anyo ng protina ng GFP. Ito ay isang mutant ng wild-type na may pinahusay na mga katangian. Samakatuwid, ang EFGP ay may mas mataas na lakas ng signal at mas mataas na sensitivity. Samakatuwid, maaari nating gamitin ito sa mga mammalian vectors. Sa kaibahan, ang paggamit ng GFP ay pangunahin lamang sa mga hindi mammalian vectors. Sa kabuuan, ito ang pagkakaiba ng GFP at EGFP.
